苦參堿對大鼠急性心肌缺血性損傷的保護作用

【摘要】  目的 研究苦參堿對大鼠急性心肌缺血性損傷的保護作用。方法 將SD大鼠隨機分為7組：正常對照組、假手術組、模型組、硝酸甘油組、苦參堿2.5、5、10mg/kg劑量組。應用左冠狀動脈前降支（LAD）結扎法制備大鼠急性心肌缺血模型。記錄結扎前、結扎后1、5、15、30、60min大鼠心率（HR）、平均動脈血壓（MAP）；應用分光光度計法檢測血清中肌酸激酶（CK）活性和一氧化氮（NO）含量。結果 靜脈注射苦參堿5、10mg/kg均可使大鼠HR、MAP明顯升高(P＜0.05或P＜0.01),此作用在左冠狀動脈前降支結扎后15min最明顯。靜脈注射苦參堿5、10mg/kg，可降低急性心肌缺血大鼠血清CK活性（P＜0.05或P＜0.01）；靜脈注射苦參堿2.5、5、10mg/kg，可增加急性心肌缺血大鼠血清NO含量（P＜0.05或P＜0.01）。結論 靜脈注射苦參堿對大鼠急性心肌缺血性損傷有保護作用。

【關鍵詞】  苦參堿; 急性心肌缺血; 肌酸激酶; 一氧化氮中醫論文發表

　　Abstract: Objective  To explore myocardial protective effects of matrine (MT) on acute myocardial ischemic injury (AMI) in rats. Methods   Sprague�睤awley rats were divided into seven groups, i.e., control, sham operation, AMI, nitroglycerin+AMI, AMI+MT 2.5mg/kg, 5mg/kg, or 10mg/kg. Rat models of AMI were established by ligation left anterior descending coronary artery. At pre�� occlusion and 1, 5, 15, 30, 60 min after left anterior descending artery (LAD) occlusion , heart rate(HR) and mean arterial pressure (MAP) were recorded . The activity of creatine kinase (CK) and content of nitric oxide (NO)  in blood were measured with spectrometer. Results  After LAD occlusion , HR, MAP were significantly increased (P＜0.05 orP＜0.01) in AMI rats after MT administration at the dosage of 5 mg/kg, 10 mg/kg. At 15 min after LAD occlusion. The CK activity was significantly reduced in AMI rats after MT administration at the dosage of 5 mg/kg, 10 mg/kg (P＜0.01). the NO content was significantly increased in AMI rats after MT administration at the dosage of 2.5 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg (P＜0.05 or P＜0.01). Conclusion  Intravenous matrine can protect acute myocardial ischemic injury in rats.

　　Key words：matrine; acute myocardial ischemia; creatine kinase; nitric oxide

　　實驗研究證明，苦參堿在抗心率失常方面有很好的作用［1］。本實驗采用結扎左冠狀動脈前降支的方法，制備大鼠急性心肌缺血模型，探討苦參堿對大鼠急性心肌缺血性損傷的保護作用。

　　1  材料和方法

　　1.1  實驗材料

　　1.1.1  藥品:苦參堿由寧夏紫荊花藥業股份有限公司提供,批號:80041122；烏拉坦(氨基甲酸乙脂)購于中國醫藥(集團)上海化學試劑公司，批號:2004102；NO試劑盒購自南京建成生物工程研究所，批號：20060213；肌酸激酶試劑盒購自南京建成生物工程研究所，批號：20060118。

　　1.1.2  動物: 健康成年雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠，清潔級，體重250～300g,由寧夏醫學院實驗動物中心提供。

　　1.1.3  儀器:BL-420四道生物機能實驗系統，成都泰盟科技有限公司產品。

　　1.2  實驗方法

    將SD大鼠隨機分為7組，每組8只，分別為正常對照組、假手術組、模型組、硝酸甘油組、苦參堿2.5、5、10mg/kg劑量組。按分組處理大鼠后，應用左冠狀動脈前降支（LAD）結扎法制備大鼠急性心肌缺血模型［2］。應用BL-420生物機能實驗系統記錄結扎前、結扎后1、5、15、30、60min大鼠心率（HR）、平均動脈血壓（MAP）。結扎大鼠左冠狀動脈前降支3h后，經股靜脈抽血，室溫靜置30min,3000r/min離心15min,取上清－70℃凍存備用，應用分光光度計法檢測血清中CK（肌酸激酶）活性和NO含量。

　　1.3  統計學方法：結果以（±s）表示,采用SPSS 11.5統計軟件對各組參數進行單因素方差分析。以P＜0.05為有統計學意義。
　2  結果

    與對照組和假手術組比較，左冠狀動脈前降支結扎后1、5、15、30、60min，模型組大鼠HR、MAP明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)；與模型組比較，左冠狀動脈前降支結扎后5min，苦參堿10mg/kg劑量組大鼠 HR、MAP明顯升高(P＜0.05)；與模型組比較，左冠狀動脈前降支結扎后15min，苦參堿5、10mg/kg劑量組大鼠 HR、MAP明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)；與模型組比較，左冠狀動脈前降支結扎后30、60min，苦參堿10mg/kg劑量組大鼠 MAP明顯升高(P＜0.05)；與模型組比較，靜脈注射苦參堿5、10mg/kg，可降低急性心肌缺血大鼠血清CK活性（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組比較，靜脈注射苦參堿2.5、5、10mg/kg，可增加急性心肌缺血大鼠血清NO含量（P＜0.05或P＜0.01）,見表1、2、3。表1  苦參堿對急性心肌缺血大鼠HR的影響(略)表2  苦參堿對急性心肌缺血大鼠MAP的影響(略)表3  苦參堿對急性心肌缺血大鼠血清CK活性和NO含量的影響(略)

　　3  討論

    冠狀動脈結扎后可引起不可逆的心肌細胞損傷和組織壞死，導致心臟泵血功能減弱并誘發致命性心率失常［3］。在以往的研究中已證實苦參堿在對抗心律失常方面有顯著作用［1］。本實驗主要從苦參堿對急性心肌缺血大鼠HR和MAP，血清CK活性和NO含量等方面的影響，探討其對缺血心肌損傷的保護作用。

    血流動力學的變化在冠心病心絞痛的發病機制中起重要作用［4］，冠狀動脈結扎后3～5s內心室的舒張和收縮速度減慢，數秒鐘后心電圖ST段抬高，心室舒張末壓增加，動脈收縮壓降低。本研究提示靜脈注射苦參堿5、10mg/kg均可改善急性心肌缺血大鼠HR和MAP，此作用在左冠狀動脈前降支結扎后15min最明顯。本室研究還表明靜脈注射苦參堿可改善急性心肌缺血大鼠的心功能［5］，提示靜脈注射苦參堿可通過改善急性心肌缺血大鼠血流動力學的變化，達到保護缺血心肌的作用。
   
　　NO是通過組織細胞中存在的一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸(L-arg)產生。NO在心肌缺血損傷中有著十分重要的作用，它不僅參與對冠脈血管舒縮的調控，維持有效的冠脈循環血流，而且可通過抗氧自由基、減輕鈣超載等作用參與對缺血心肌的保護作用［6］。Soos P等［7］研究顯示，心肌缺血早期血漿NO含量明顯下降。本實驗結果表明靜脈注射苦參堿可增加急性心肌缺血大鼠血清NO含量。尹永英等［8］通過檢測心肌組織勻漿中NO含量,分析氧化苦參堿對心肌缺血損傷后生化指標的影響，得到類似結果。

    急性心肌梗死后，心肌細胞中特有的某些小分子和大分子蛋白質可從心肌細胞逸出進入血液循環，從而成為血液中心肌壞死的標志物。心肌缺血后酶的釋放反映了細胞不可逆損傷的開始，進而可發展到細胞破裂，線粒體斷裂，肌原纖維不完整，細胞溶解，最終導致細胞死亡和組織壞死。因此，酶的漏出可認為是細胞完全壞死前的改變，心肌酶學標志物是診斷急性心肌梗死，監測其進程與評價預后的重要手段之一。近10余年來，心肌酶譜(主要包括CK、LDH及AST等)己經成為臨床最常用的輔助診斷急性心肌梗死的方法之一［9］。本實驗結果提示靜脈注射苦參堿可降低急性心肌缺血大鼠血清CK活性，減輕心肌細胞膜的損傷，對缺血心肌細胞具有保護作用。

    綜上所述,苦參堿能改善缺血心肌的心功能，降低心肌缺血大鼠血清CK活性，增加血清NO含量,具有抗心肌缺血作用,其具體作用機制有待進一步研究。

【參考文獻】中醫論文發表
  　［1］黃彩云,謝世榮,黃勝英,等.苦參堿抗心律失常作用的實驗研究［J］.大連醫科大學學報，2002,24(3):176-179.

　　［2］孟慶義.急性心肌梗死［M］. 北京:科學技術文獻出版社,2005：1-2.

　　［3］Crawford MH, DiMarco JP,et al. Physiology of coronary circulation［M］. New York: Mosby, 2001：1-9.

　　［4］郭濤,宋洪濤,韋平,等.心舒口服液對麻醉犬血流動力學的影響［J］.解放軍藥學學報,2001,32(2):138.

　　［5］聶黎虹,趙瑞寧,丁娟，等.苦參堿對急性心肌缺血大鼠血流動力學的影響［J］.寧夏醫學院學報,2008,30(5):556-558.

　　［6］Zhao X, Bai XJ, Cao YP,et al. The influence of nitric oxideon intracellular free calcium concentration during hypoxia in guinea-pigs［J］. Chinese Circulation Journal，2000，15：370-372.

　　［7］Soos P, AndrasIi T, Buhmann V, et al. Myocardial protection after systemic application of L-arginine during reperfusion［J］. Iovasc Pharmacol，2004，43：782-788.

　　［8］尹永英，張善鋒.氧化苦參堿對大鼠缺血再灌注心肌損傷生化指標的影響［J］.鄭州大學學報：醫學版，2006，41(4)：752-754.

　　［9］邢啟崇.心血管病實驗診斷學［M］.北京:人民衛生出版社,2004：118.中醫論文發表