寧夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布頻率

【摘要】  目的 了解寧夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布頻率,為臨床使用CYP2D6底物藥物提供依據。方法 采用等位基因特異擴增（ASA-PCR）技術，分析了180例回族體檢者的CYP2D6基因型。結果 CYP2D6*10基因點突變結果中野生型純合子頻率為32.3%，雜合子頻率為38.3%，突變型純合子頻率為29.4%，突變型等位基因頻率為48.6%。結論 寧夏回族人群CYP2D6*10突變基因頻率與國內外其他民族有一定差異，在臨床應用經CYP2D6代謝的藥物時應考慮個體間的代謝速率差異，確保用藥安全有效。

【關鍵詞】  CYP2D6*10；基因；多態性；回族哲學論文發表

　　Abstract: Objective  To investigate the allele　and genotype frequences of CYP2D6*10 in Ningxia Hui population. Methods  180 Ningxia Hui blood samples were collected. The ASA�睵CR  was performed and the PCR products were  genotyped.Results  The mutant allele frequences were 48.6%. Conclusion  CYP2D6*10 allele frequences between Ningxia hui ethnicity and other populations was significantly different.

　　Key words：CYP2D6*10 ；gene；polymorphism；Hui ethnicity

　　細胞色素P450 2D6 (CYP2D6) 又稱硫酸異喹胍羥化酶, 是近年來被廣泛研究的一種肝微粒體藥物氧化代謝多態性酶，該酶參與臨床常用的30多種藥物羥化反應,例如抗精神抑郁藥、抗心律失常藥、β2阻滯劑等［1-3］。由于CYP2D6 至少有50多處突變和73 種等位基因，因此酶的活性具有高度多態性［4-5 ］ 。CYP2D6基因有明顯的種族差異。我們于2007年1～7月間以寧夏回族人群為研究對象，采用等位基因特異擴增法（ASA-PCR)，對東方人群中最常見的基因突變型第10外顯子（CYP2D6*10）進行研究，以期為患者使用CYP2D6底物藥物提供依據。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料 
全血總DNA提取試劑盒、DNA Tag酶ET-500、DNA  Marker B均購自北京賽百盛生物公司；引物由大連寶生物工程有限公司合成，引物序列見表1。表1    引物序列（略）

　　1.2  方法

　　1.2.1  DNA樣品制備

　　利用2007年1～7月間收集的寧夏回族自治區人民醫院體檢的180 例回族受試者的外周血，采用北京賽百盛生物公司的硅膠膜基因組提取試劑盒提取基因組DNA，定量后稀釋成100ng/μL, 儲存于-20℃備用。

　　1.2.2  PCR擴增及產物的鑒定

　　用表1所述的3對引物（P1、P2)、（P1、P3)、（P1、P4)在PCR的反應條件下（表2）分別擴增出CYP2D6全長基因片段及包括第10外顯子多態位點的DNA片段。PCR反應體系為50μL，含有0．2 mmol/L dNTP、1．0 mol/L引物、1．25 mmol/L MgCl2、0．5 U Taq DNA聚合酶、10×PCR反應緩沖液。表2  PCR反應條件（略）

　　1.2.3  電泳及結果的統計分析

　　取PCR擴增產物用1％ 瓊脂糖凝膠進行電泳，在BioRad的Quantity One 凝膠成像分析系統儀上進行觀察和分析。確定CYP2D6*10基因型，進行基因頻率的計算分析。

　　2  結果

　　2.1  DNA提取質量

　　經紫外分光光度計檢測，180名受試者外周血白細胞中提得的DNA A260/A280均在1.8～2.0之間，純度均符合要求。

　　2.2  PCR及電泳結果

　　見圖1。用引物P1、P2擴增得到790bp全長CYP2D6基因，以P1、P3為引物可擴增出137bp CYP2D6*10野生型純合子（wt)，以P1、P4為引物可擴增出137bp CYP2D6*10突變型純合子(mt)，若以P1、P3和P1、P4為引物均可擴增出137bp CYP2D6*10片段表示CYP2D6*10為雜合子(Wt/mt)。

　　2.3  基因型及基因頻率 哲學論文發表

　　見表3，由表中數據可計算出180例受試者中CYP2D6突變等位基因頻率為48.6%。表3  180例受試者等位基因與基因型頻率（略）
　3  討論

    藥物代謝的主要場所是肝臟,肝臟進行生物轉化依賴于微粒體中的多種酶系,其中最重要的是細胞色素P450 混合功能氧化酶系統。細胞色素氧化酶P450 (CYP450) 是一類參與內源性和外源性化合物代謝的酶,這類酶有許多同工酶,根據氨基酸序列符合程度,P450 分為多個基因P亞基因家族,同一家族的酶具有相似的功能。目前已知在人體內有35 種P450 基因,主要有CYP123 三個家族酶系參與體內外源性物質的轉化,重要的有7 種,CYP2D6 即為其中的1 種。CYP2D6位于第22號染色體長臂上，與相關基因CYP2D7和一假基因CYP2D8P共同組成CYP2D基因群。現已發現CYP2D6 對藥物的代謝呈現出明顯的個體差異和種族差異及地域差異［6-7］。目前已報道多種CYP450 酶活性受基因多態性的控制, 包括CYP2C9、CYP2C19 、CYP3A4和CYP2 E1等 ,有關CYP2A6基因多態性及其與表型關系的研究也有陸續報道。Heim［8］等首先報道了CYP2D6 等位基因，CYP2D6 基因缺陷導致CYP2D6弱代謝性。隨后，新的等位基因不斷被發現。經研究發現中國人多攜帶有CYP2D6*10突變性等位基因，其外顯子1第188為堿基C為T取代，造成表達的CYP2D6酶第34位脯氨酸變為絲氨酸，導致酶活性的下降。

    本研究采用ASA-PCR法第一步擴增出790bpCYP2D6基因片段，第二步擴增中引物P3、P4的3'端為G的與野生型等位基因配對，3'端為A與突變性等位基因配對，通過擴增得到野生型和突變型基因片段。由于Taq 酶缺乏3′→5′外切酶活性,當3′形成錯配時,磷酸酯鍵難于形成,導致擴增終止。反之,引物3′端與模板配對成功,則通過擴增,得到野生型及突變型等位基因的特異片段。

    本研究發現CYP2D6*10突變基因頻率為48.6%，比中國漢族人（58.4%)、韓國人（51%）較低；比中國苗族人（47.5%）、日本人（38.6%）、歐洲白種人（1.5%）較高［9］。由于突變基因導致酶活性降低，減弱了對藥物的代謝作用，在服用同一劑量藥物時更易發生藥物毒副作用。因此，測定中國各民族CYP2D6基因型，有利于降低CYP2D6底物藥發生不良反應的風險，對于指導臨床個體化合理用藥具有重要指導作用。

【參考文獻】
  　　［1］Merce Garcia-Barcelo,Lok Yee Chow,Helen Fung Kum Chiu.Genetic Analysis of the CYP2D6 Locus in a Hong Kong Chinese Population［J］. Clin Chem,2004, 46(1)：18-23.

　　［2］Maria C,Ledesmal,Jose A.G,Agundez.Identification of subtypes of CYP2D Gene Rearrangements among Carriers of CYP2D6 gene Deletion and Duplication［J］.Clin Chem,2005,51(6):939-943.

　　［3］Ingelman-Sundberg M. Pharmacogenetics of cytochrome P450 and its application in drug therapy: the past, present, and future ［J］. Trends Pharmacol Sci，2004, 25: 193-200.

　　［4］Ingelman-Sundberg M. Genetic polymorphisms of cytochrome P4502D6 (CYP2D6): clinical consequences, evolutionary aspects, and functional diversity［J］. Pharmacogenom J,2005,5:6-13.

　　［5］Heim MH,Meyer UA.Evolution of a highly polymorphic human cytochrome P450 gene cluster:CYP2D6 ［J］.Genomics,1992,14:49-58.

　　［6］CYP2D6 allele nomenclature. http://www.imm.ki.se/CYPalleles/cyp2d6.htm (accessed March 10, 2005).

　　［7］Bradford LD.CYP2D6 allele frequencyin European Caucasians, Asians, Africans, and their descendants［J］.Pharmacogenom J,2002,3:229-243.

　　［8］Heim M,Meyer UA.Gentyping of poor metabolizers of debrsoquine by allele-specific PCR amplification［J］. Lancet,1990,336:529-532.

　　［9］雷霆雯，許慶忠，吳青青，等.中國苗族 CYP2D6*10基因多態性的研究［J］.中國公共衛生，2004,20（4）:439-440.哲學論文發表