寧夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布頻率

【摘要】  目的 了解寧夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布頻率,為臨床使用CYP2D6底物藥物提供依據(jù)。方法 采用等位基因特異擴(kuò)增（ASA-PCR）技術(shù)，分析了180例回族體檢者的CYP2D6基因型。結(jié)果 CYP2D6*10基因點(diǎn)突變結(jié)果中野生型純合子頻率為32.3%，雜合子頻率為38.3%，突變型純合子頻率為29.4%，突變型等位基因頻率為48.6%。結(jié)論 寧夏回族人群CYP2D6*10突變基因頻率與國(guó)內(nèi)外其他民族有一定差異，在臨床應(yīng)用經(jīng)CYP2D6代謝的藥物時(shí)應(yīng)考慮個(gè)體間的代謝速率差異，確保用藥安全有效。

【關(guān)鍵詞】  CYP2D6*10；基因；多態(tài)性；回族哲學(xué)論文發(fā)表

　　Abstract: Objective  To investigate the allele　and genotype frequences of CYP2D6*10 in Ningxia Hui population. Methods  180 Ningxia Hui blood samples were collected. The ASA�睵CR  was performed and the PCR products were  genotyped.Results  The mutant allele frequences were 48.6%. Conclusion  CYP2D6*10 allele frequences between Ningxia hui ethnicity and other populations was significantly different.

　　Key words：CYP2D6*10 ；gene；polymorphism；Hui ethnicity

　　細(xì)胞色素P450 2D6 (CYP2D6) 又稱硫酸異喹胍羥化酶, 是近年來被廣泛研究的一種肝微粒體藥物氧化代謝多態(tài)性酶，該酶參與臨床常用的30多種藥物羥化反應(yīng),例如抗精神抑郁藥、抗心律失常藥、β2阻滯劑等［1-3］。由于CYP2D6 至少有50多處突變和73 種等位基因，因此酶的活性具有高度多態(tài)性［4-5 ］ 。CYP2D6基因有明顯的種族差異。我們于2007年1～7月間以寧夏回族人群為研究對(duì)象，采用等位基因特異擴(kuò)增法（ASA-PCR)，對(duì)東方人群中最常見的基因突變型第10外顯子（CYP2D6*10）進(jìn)行研究，以期為患者使用CYP2D6底物藥物提供依據(jù)。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料 
全血總DNA提取試劑盒、DNA Tag酶ET-500、DNA  Marker B均購(gòu)自北京賽百盛生物公司；引物由大連寶生物工程有限公司合成，引物序列見表1。表1    引物序列（略）

　　1.2  方法

　　1.2.1  DNA樣品制備

　　利用2007年1～7月間收集的寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院體檢的180 例回族受試者的外周血，采用北京賽百盛生物公司的硅膠膜基因組提取試劑盒提取基因組DNA，定量后稀釋成100ng/μL, 儲(chǔ)存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

　　1.2.2  PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物的鑒定

　　用表1所述的3對(duì)引物（P1、P2)、（P1、P3)、（P1、P4)在PCR的反應(yīng)條件下（表2）分別擴(kuò)增出CYP2D6全長(zhǎng)基因片段及包括第10外顯子多態(tài)位點(diǎn)的DNA片段。PCR反應(yīng)體系為50μL，含有0．2 mmol/L dNTP、1．0 mol/L引物、1．25 mmol/L MgCl2、0．5 U Taq DNA聚合酶、10×PCR反應(yīng)緩沖液。表2  PCR反應(yīng)條件（略）

　　1.2.3  電泳及結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析

　　取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1％ 瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，在BioRad的Quantity One 凝膠成像分析系統(tǒng)儀上進(jìn)行觀察和分析。確定CYP2D6*10基因型，進(jìn)行基因頻率的計(jì)算分析。

　　2  結(jié)果

　　2.1  DNA提取質(zhì)量

　　經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)，180名受試者外周血白細(xì)胞中提得的DNA A260/A280均在1.8～2.0之間，純度均符合要求。

　　2.2  PCR及電泳結(jié)果

　　見圖1。用引物P1、P2擴(kuò)增得到790bp全長(zhǎng)CYP2D6基因，以P1、P3為引物可擴(kuò)增出137bp CYP2D6*10野生型純合子（wt)，以P1、P4為引物可擴(kuò)增出137bp CYP2D6*10突變型純合子(mt)，若以P1、P3和P1、P4為引物均可擴(kuò)增出137bp CYP2D6*10片段表示CYP2D6*10為雜合子(Wt/mt)。

　　2.3  基因型及基因頻率 哲學(xué)論文發(fā)表

　　見表3，由表中數(shù)據(jù)可計(jì)算出180例受試者中CYP2D6突變等位基因頻率為48.6%。表3  180例受試者等位基因與基因型頻率（略）
　3  討論

    藥物代謝的主要場(chǎng)所是肝臟,肝臟進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化依賴于微粒體中的多種酶系,其中最重要的是細(xì)胞色素P450 混合功能氧化酶系統(tǒng)。細(xì)胞色素氧化酶P450 (CYP450) 是一類參與內(nèi)源性和外源性化合物代謝的酶,這類酶有許多同工酶,根據(jù)氨基酸序列符合程度,P450 分為多個(gè)基因P亞基因家族,同一家族的酶具有相似的功能。目前已知在人體內(nèi)有35 種P450 基因,主要有CYP123 三個(gè)家族酶系參與體內(nèi)外源性物質(zhì)的轉(zhuǎn)化,重要的有7 種,CYP2D6 即為其中的1 種。CYP2D6位于第22號(hào)染色體長(zhǎng)臂上，與相關(guān)基因CYP2D7和一假基因CYP2D8P共同組成CYP2D基因群。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)CYP2D6 對(duì)藥物的代謝呈現(xiàn)出明顯的個(gè)體差異和種族差異及地域差異［6-7］。目前已報(bào)道多種CYP450 酶活性受基因多態(tài)性的控制, 包括CYP2C9、CYP2C19 、CYP3A4和CYP2 E1等 ,有關(guān)CYP2A6基因多態(tài)性及其與表型關(guān)系的研究也有陸續(xù)報(bào)道。Heim［8］等首先報(bào)道了CYP2D6 等位基因，CYP2D6 基因缺陷導(dǎo)致CYP2D6弱代謝性。隨后，新的等位基因不斷被發(fā)現(xiàn)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)中國(guó)人多攜帶有CYP2D6*10突變性等位基因，其外顯子1第188為堿基C為T取代，造成表達(dá)的CYP2D6酶第34位脯氨酸變?yōu)榻z氨酸，導(dǎo)致酶活性的下降。

    本研究采用ASA-PCR法第一步擴(kuò)增出790bpCYP2D6基因片段，第二步擴(kuò)增中引物P3、P4的3'端為G的與野生型等位基因配對(duì)，3'端為A與突變性等位基因配對(duì)，通過擴(kuò)增得到野生型和突變型基因片段。由于Taq 酶缺乏3′→5′外切酶活性,當(dāng)3′形成錯(cuò)配時(shí),磷酸酯鍵難于形成,導(dǎo)致擴(kuò)增終止。反之,引物3′端與模板配對(duì)成功,則通過擴(kuò)增,得到野生型及突變型等位基因的特異片段。

    本研究發(fā)現(xiàn)CYP2D6*10突變基因頻率為48.6%，比中國(guó)漢族人（58.4%)、韓國(guó)人（51%）較低；比中國(guó)苗族人（47.5%）、日本人（38.6%）、歐洲白種人（1.5%）較高［9］。由于突變基因?qū)е旅富钚越档停瑴p弱了對(duì)藥物的代謝作用，在服用同一劑量藥物時(shí)更易發(fā)生藥物毒副作用。因此，測(cè)定中國(guó)各民族CYP2D6基因型，有利于降低CYP2D6底物藥發(fā)生不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)于指導(dǎo)臨床個(gè)體化合理用藥具有重要指導(dǎo)作用。

【參考文獻(xiàn)】
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