槐定堿對(duì)急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD、GSH-PX及NO的影響

【摘要】  目的 研究槐定堿對(duì)急性心肌缺血大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)及NO的影響。方法 將SD大鼠隨機(jī)分為8組，每組8只，分別為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、丹參組、硝酸甘油組、槐定堿2.5、5和10mg/kg劑量組。結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)制備大鼠急性心肌缺血模型，采用比色法檢測(cè)靜脈注射槐定堿各組血清中MDA、NO含量和SOD、GSH-PX活性。結(jié)果 與模型組相比，槐定堿2.5、5、10mg/kg組可降低急性心肌缺血大鼠血清MDA含量、升高SOD活性和NO含量(P<0.05或P< 0.01)。槐定堿5、10mg/kg組能升高GSH-PX活性 (P<0.05或P<0.01)。結(jié)論 槐定堿對(duì)急性心肌缺血損傷保護(hù)作用的機(jī)制可能與其清除氧自由基和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】  槐定堿;急性心肌缺血;氧自由基文學(xué)論文發(fā)表

             槐定堿(Sophoridine，SR)是從豆科槐屬植物苦豆子中分離提純出來(lái)的一種生物堿。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)槐定堿在減慢心率[1]、抗心律失常、抗病毒、抗炎、抗菌[2-3]、增強(qiáng)免疫及抗腫瘤等[4]方面有重要的藥理活性和應(yīng)用前途。本研究采用化學(xué)比色法檢測(cè)大鼠急性心肌缺血時(shí)血清中丙二醛(MDA)含量、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活性及一氧化氮(NO)含量，以探討槐定堿對(duì)大鼠急性心肌缺血損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　雄性健康SD大鼠250～300g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟)，DH-140動(dòng)物人工呼吸機(jī)(浙江)，721型分光光度計(jì)(上海)，槐定堿(純度96%)，寧夏紫金花藥業(yè)股份有限公司鹽池藥廠提供，批號(hào)021180;丹參滴注液(安徽華源生物藥業(yè)，批號(hào)05112501);硝酸甘油注射液(山西康寶生物制品股份有限公司，批號(hào)060501);氨基甲酸乙脂(上海化學(xué)試劑公司，批號(hào)20041023)。試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，分別為MDA試劑盒(批號(hào)20060121)、SOD試劑盒(批號(hào)20060214)、GSH-PX試劑盒(批號(hào)20060217)、NO試劑盒(批號(hào)20060213)。

　　1.2 實(shí)驗(yàn)方法

　　將SD大鼠隨機(jī)分為8組，每組8只，分別為正常對(duì)照組(給予等容量NS)、假手術(shù)組、模型組、丹參組(125mg/kg)、硝酸甘油組(0.3mg/kg)、槐定堿2.5、5和10mg/kg劑量組。采用股靜脈注射藥物，20 min后結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支 (LAD)制備大鼠急性心肌缺血模型，假手術(shù)組LAD下只穿線不結(jié)扎。心肌缺血模型建立成功的標(biāo)準(zhǔn)：①肉眼觀察：心前區(qū)顏色變暗;②心電圖的改變：標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)��?lián)ST段抬高;③血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的改變：心率減慢，動(dòng)脈血壓下降，心臟收縮和舒張功能降低;④組織學(xué)改變：電鏡下可見(jiàn)線粒體損傷等心肌缺血的表現(xiàn)。缺血3h后靜脈采血，靜置30min后，離心(3000r/min,10min)取血清，分裝后置于-70℃冰箱保存。用比色法測(cè)定血清MDA含量、SOD活性、GSH-PX活性及NO含量。

　　1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

　　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。多組間比較采用One-Way ANOVA分析，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　模型組大鼠血清中MDA含量明顯升高，SOD、GSH-PX活性和NO含量明顯降低(P<0.01)。與模型組相比，槐定堿 2.5、5、10mg/kg各組均能降低血清MDA含量，升高血清SOD、GSH-PX活性和NO含量(P<0.05或P<0.01);槐定堿 10mg/kg組與兩組對(duì)照藥物相比對(duì)大鼠急性心肌缺血時(shí)血清MDA含量、SOD、GSH-PX活性及NO含量的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，槐定堿能降低大鼠急性心肌缺血時(shí)血清MDA含量，升高血清SOD、GSH-PX活性和NO含量。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 槐定堿對(duì)急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD、GSH-PX及NO的影響

　　3 討論

　　近年來(lái)，隨著心肌缺血損傷機(jī)制研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)大量的氧自由基生成及脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)是心肌缺血損傷的主要機(jī)制之一[5]。氧自由基[即所謂活性氧:O-2(超氧化物陰離子自由基)、·OH(羥自由基)、過(guò)氧化氫等]是心肌細(xì)胞的正常代謝產(chǎn)物，可對(duì)機(jī)體產(chǎn)生損傷。但正常心肌組織含有抗氧化防御系統(tǒng)：SOD、CAT(過(guò)氧化氫酶)、GSH-PX、POD(過(guò)氧化酶)及VitC、E和硒等，可以清除或協(xié)助清除氧自由基，以保持氧自由基的生成和清除的動(dòng)態(tài)平衡，使心肌細(xì)胞免受活性氧損害和維持正常生理功能。在各種疾病引發(fā)的心肌缺血過(guò)程中，機(jī)體內(nèi)氧自由基的生成明顯增多，而對(duì)氧自由基的清除能力急劇下降，從而造成心肌組織中氧自由基的大量蓄積。氧自由基對(duì)心肌細(xì)胞的損傷機(jī)制是多方面的，主要包括對(duì)心肌細(xì)胞膜、DNA及線粒體的損傷。氧自由基能誘導(dǎo)心律失常、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、激活轉(zhuǎn)錄因子、誘導(dǎo)基因表達(dá)等[6]。
　氧自由基與不飽和脂肪酸反應(yīng)形成過(guò)氧化脂質(zhì)，過(guò)氧化脂質(zhì)進(jìn)一步分解成MDA。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的典型代表，它不僅反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，而且還影響了膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，導(dǎo)致膜對(duì)Ca2+的通透性增高，能繼發(fā)性地引起細(xì)胞內(nèi)鈣超載，而胞內(nèi)鈣失衡是造成細(xì)胞壞死或凋亡的重要機(jī)制之一。因此通過(guò)降低脂質(zhì)代謝產(chǎn)物MDA水平，可以直接或間接地減輕細(xì)胞的凋亡壞死。SOD是機(jī)體清除氧自由基的重要酶類(lèi)，對(duì)機(jī)體的氧化和抗氧化平衡起到至關(guān)重要的作用。所以，通過(guò)提高SOD的活性，可以減輕細(xì)胞的的氧化損傷[7]。

　　GSH-PX是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過(guò)氧化氫分解的酶。它特異地催化還原型谷胱甘肽(GSH)對(duì)H2O2的還原反應(yīng)，可以起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整性的作用。GSH-PX與SOD等酶共同組成一個(gè)氧化有機(jī)氫過(guò)氧化物酶系，主要負(fù)責(zé)清除H2O2。這些酶能協(xié)同地防止活性氧損傷細(xì)胞膜，并且彼此之間相互保護(hù)。如這一系統(tǒng)中某一種酶活性下降或缺失，則會(huì)引起細(xì)胞受損或不可逆性損傷。

　　NO是一種由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸生成的難溶于水的非極性氣體(L-精氨酸+NADPH+O2→瓜氨酸+NO+NADP+)，因?yàn)樗�的分子結(jié)構(gòu)中具有不配對(duì)電子，所以也屬于自由基。由于NO具有脂溶性，能通過(guò)生物膜快速擴(kuò)散，因而在細(xì)胞間較廣泛地起作用。文學(xué)論文發(fā)表

　　綜上所述，本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠血清中MDA含量明顯升高，SOD、GSH-PX活性和NO含量明顯降低(P<0.01)，表明急性心肌缺血可產(chǎn)生氧自由基引起心肌損傷。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，槐定堿能提高心肌缺血大鼠血清SOD、GSH-PX活性及NO含量，增強(qiáng)了內(nèi)源性氧自由基清除系統(tǒng)的功能，顯著減少血清脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的水平，減輕了氧自由基對(duì)心肌的損傷。各組雖然與假手術(shù)組比較各指標(biāo)有所升高或降低，但與模型組比均有改善。提示槐定堿具有清除自由基和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用，這可能是槐定堿保護(hù)缺血時(shí)心肌細(xì)胞損傷的機(jī)制之一。

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