老瓜頭生物總堿對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中細(xì)胞因子及NO的影響

【摘要】  目的 觀察老瓜頭生物總堿對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中白細(xì)胞介素-1 (IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)和一氧化氮(NO)含量的影響。方法 采用弗氏完全佐劑(CFA)制備大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)模型，用放射免疫方法檢測(cè)大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的含量;用硝酸還原法檢測(cè)大鼠血清中NO的含量。結(jié)果 與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠血清中IL-1β、TNF-α及NO含量升高，IL-4、IL-10含量降低(P<0.05或P<0.01)。與模型組相比，老瓜頭生物總堿能夠降低佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-1β、TNF-α及NO含量，升高IL-4、IL-10含量。結(jié)論 老瓜頭生物總堿的抗炎作用可能與下調(diào)致炎因子(IL-1β、TNF-α、NO)，上調(diào)抗炎因子(IL-4、IL-10)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】  老瓜頭生物總堿;佐劑性關(guān)節(jié)炎;白細(xì)胞介素-1β;腫瘤壞死因子;白細(xì)胞介素-4;白細(xì)胞介素-10

             老瓜頭(Cynanchum Komarovii AI. Iljiniski)系籮摩科鵝絨藤屬多年草本生植物，別名牛心樸子，廣泛分布于次生沙漠中的半固定沙丘和荒漠流沙區(qū)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)研究表明其化學(xué)成分除含有一些無(wú)機(jī)元素外，還含有生物堿、揮發(fā)油、甙類、黃酮醇類、糖類等化合物。老瓜頭提取物有抗炎、抗菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰、平喘等作用[1]。老瓜頭生物總堿(Total Alkaloid of Cynanchum Komarovii AI. Iljiniski, TACKI)是從老瓜頭中提取的生物總堿，具有抑制蛋清致大鼠足趾腫脹、大鼠棉球肉芽腫以及角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠氣囊滑膜炎等抗炎作用[2]。本研究以大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(Adjuvant Arthritis, AA)為模型，觀察TACKI對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎血清細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10及NO的影響。

　　1 材料與方法歷史論文發(fā)表

　　1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清潔級(jí)，體重150～200g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)為SCXK(寧)2005-0001。隨機(jī)分組，常規(guī)飼養(yǎng)，自然晝夜。

　　1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 大鼠足容積測(cè)試儀，自制; UV/9100紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司); GC1200型γ計(jì)數(shù)器(中國(guó)科技大學(xué)中佳光電儀器公司)

　　1.3 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑 老瓜頭生物總堿(寧夏回族自治區(qū)物理研究所分析測(cè)試中心孟協(xié)中研究員提供)，雷公藤多苷片(上海醫(yī)科大學(xué)紅旗制藥廠，批號(hào)040102，10mg/片)，弗氏完全佐劑(complete Freund’s adjuvant, CFA;美國(guó)Sigma公司，批號(hào)Lot084k8928)，TNF-α、IL-1放免試劑盒購(gòu)自解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免研究所;IL-4、IL-10放免試劑盒購(gòu)自北京北方生物技術(shù)研究所;NO硝酸還原法檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

　　1.4 方法

　　1.4.1 大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型(Adjuvant Arthritis, AA)制備 按照文獻(xiàn)[3]方法，除正常對(duì)照組外，其他各組大鼠右后足常規(guī)消毒后，于足跖皮內(nèi)注射CFA 0.1mL致炎。

　　1.4.2 分組及給藥方法 大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只。(1)正常對(duì)照組;(2)模型對(duì)照組均給予生理鹽水灌胃;(3)雷公藤多苷組將雷公藤多苷片研成細(xì)末，加生理鹽水，配制成混懸液(6.0mg/kg);(4)TACKI高、中、低劑量組(20.0、10.0、5.0mg/kg)，用生理鹽水配制，放置1d使其充分溶解，以上藥物均以10mL/kg灌胃，每天1次，于致炎后第19天開(kāi)始給藥，連續(xù)8d。

　　1.5 血清中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10及NO含量的測(cè)定 按照試劑盒說(shuō)明操作。

　　1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以(±s)表示。應(yīng)用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，多樣本均數(shù)間比較采用One-Way ANOVA檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　2.1 TACKI對(duì)AA大鼠血清TNF-α、IL-1β含量的影響

　　CFA致炎后27d，模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β含量明顯高于正常對(duì)照組 (P<0.01);中、高劑量組大鼠血清TNF-α、IL-1β含量均低于模型組(P<0.05或P<0.01)，與雷公藤多苷組相當(dāng)(P>0.05)，且接近正常對(duì)照組水平(P>0.05)，見(jiàn)表1。

　　2.2 TACKI對(duì)AA大鼠血清IL-4、IL-10含量的影響

　　CFA致炎后27d，模型組大鼠血清IL-4、IL-10含量降低，高劑量組大鼠血清IL-4、IL-10含量高于模型組(P<0.05 或P<0.01)，見(jiàn)表1。

　　2.3 TACKI對(duì)AA大鼠血清中NO含量的影響

　　CFA致炎后27d，模型組大鼠血清中NO含量升高， TACKI中、高劑量組大鼠血清中NO含量明顯低于模型組(P<0.01)，其高劑量組低于雷公藤多苷組(P<0.05)， 接近正常對(duì)照組水平(P>0.05)，見(jiàn)表1。表1 TACKI對(duì)AA大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10、NO含量的影響

　3 討論

　　近年研究表明，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的失調(diào)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis, RA)的發(fā)病過(guò)程中占有重要地位[4]，具有促炎、抑炎或刺激、抑制的正負(fù)反饋的免疫調(diào)控作用[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量升高，IL-4、IL-10含量降低，提示AA大鼠病變過(guò)程中存在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)平衡失調(diào)，表現(xiàn)為致炎因子的升高和抗炎因子的減少。TACKI中、高劑量組大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量降低， TACKI高劑量組大鼠血清中IL-4、IL-10含量升高。提示TACKI發(fā)揮其抗炎作用可能與通過(guò)下調(diào)致炎因子(TNF-α、IL-1β)、上調(diào)抗炎因子(IL-4、IL-10)，調(diào)節(jié)AA大鼠血清中細(xì)胞因子的平衡有關(guān)。

　　關(guān)節(jié)炎大鼠的多發(fā)性關(guān)節(jié)病即與NO的過(guò)量產(chǎn)生有關(guān)[6]， NO可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放IL-1、TNF-α形成惡性循環(huán)而增加RA的臨床癥狀，因此，減少NO可以減輕關(guān)節(jié)損傷。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CFA致炎后27d模型組大鼠血清中NO含量升高， TACKI中、高劑量組能夠降低大鼠血清中NO含量，且其高劑量組大鼠血清中NO含量與雷公藤多苷組相當(dāng)[7]，接近正常對(duì)照組水平。提示TACKI發(fā)揮抗炎作用可能與其抑制細(xì)胞NO的合成有關(guān)。歷史論文發(fā)表

【參考文獻(xiàn)】
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