Claudin-2在大腸癌中的表達及其與臨床病理特征的關系

【摘要】  目的 觀察緊密連接蛋白 Claudin-2在大腸癌組織中的表達及其與大腸癌發生和發展的關系。方法 運用免疫組化技術檢測Claudin-2在大腸癌及癌旁組織、正常組織中的表達，并分析Claudin-2蛋白表達與大腸癌臨床各病理特征的關系。結果 Claudin-2在大腸癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織及正常組織(P<0.05)。Claudin-2在大腸癌組織中的陽性表達與腫瘤的分化程度、Dukes分期密切相關(P<0.05)。結論 大腸癌與癌旁組織及正常組織相比，Claudin-2表達陽性率明顯升高，其改變在大腸癌的發生發展中可能起重要作用。

【關鍵詞】  緊密連接蛋白;大腸癌;免疫組織化學

　大腸癌是臨床上最常見的消化道惡性腫瘤之一，嚴重地威脅著人類的健康。大腸癌的發病率男女均處于惡性腫瘤的第 3 位，其中在西方發達國家，大腸癌的發病率處于第 2 位[1-2]，在我國病死率列癌癥死因的第5位[3]。目前，大腸癌的病因和發病機制尚無明確定論，因此從分子水平研究大腸癌的發病機制，尋找與大腸癌發生、發展密切相關的致病因素，以達到早期預防、早期診斷、早期治療的目的，提高5年生存率具有重要的現實意義。

　　緊密連接是細胞之間主要的黏附形式之一，對維持機體內環境的穩定，保持上皮細胞的極性，調節細胞的運動、增殖、分化，以及細胞功能的發揮均起重要作用。近年已證實claudins蛋白是構成緊密連接的主要骨架蛋白[4]，其異常表達可能在多種疾病的發病過程中起重要作用。目前研究較多的有claudin-1,-3,-4,-7和-16等，對于Claudin-2卻鮮有報道。我們應用免疫組化技術對大腸癌、癌旁及正常組織中Claudin-2進行檢測，觀察其在大腸癌組織中的表達。

　　1 材料與方法工程師論文發表

　　1.1 臨床資料 選自寧夏醫科大學附屬醫院2008年11月-2009年6月間，經病理證實為大腸癌的手術標本35例。其中，男19例，女16例，年齡25～82歲。高分化腺癌9例，中分化腺癌16例，低分化腺癌10例。Dukes分期：A期3例，B期12例，C期16例，D期4例。腸管離體后立即取材，每例標本癌組織取1塊，癌旁組織(距腫瘤切緣外3 cm)1塊，正常組織(距腫瘤10cm以上)1塊。各約0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm大小。全部病例術前均未行放、化療，臨床病例資料完整。

　　1.2 試劑與儀器 一抗：鼠抗人claudin抗體(Zymed公司，美國);S-P免疫組化染色試劑盒(即用型免疫組化ElivisionTMplus廣譜試劑盒)購自福州邁新生物技術公司;PBS液(pH7.4);95%乙醇;10%PLL;石蠟切片機(LEICAKM2245切片機，德國);脫水機(LEICAKM300，德國);Nikon eclipse E800顯微鏡(日本產)。

　　1.3 免疫組化 標本均經10%中性甲醛固定，石蠟包埋，5mm連續切片，常規脫蠟、水化，用常規S-P法進行免疫組織染色，分別檢測Claudin-2在大腸癌組織、癌旁組織和正常大腸組織中的表達。一抗為鼠抗人Claudin-2抗體，嚴格依照試劑盒使用說明操作。

　　1.4 免疫組化陽性結果的判定 所有石蠟切片由兩名病理科醫師獨立評判后綜合評定。Claudin-2蛋白陽性反應為在細胞漿呈棕黃色顆粒。評分標準：陽性細胞數<25%時記為(-)，26%～50%為(+)，51%～75%為(++)，>75%為(+++)。

　　1.5 統計學方法 采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

　　2 結果

　　2.1 Claudin-2在大腸癌組織、癌旁組織及正常組織中陽性表達的免疫組化結果

　　免疫組化染色結果顯示，大腸癌組織中Claudin-2陽性染色為棕黃色，主要定位于細胞漿中。Claudin -2在大腸癌組織、癌旁組織及正常組織中的陽性表達率分別為68.57%(24/35)、42.86% (15/35)和25.71% (9/35)，見圖1-6(封4)。Claudin-2在大腸癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織和正常組織，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。表1 Claudin-2在大腸癌、癌旁組織及正常組織中的表達

　　2.2 大腸癌組織中Claudin-2表達與大腸癌臨床病理特征的關系

　　大腸癌組織中Claudin-2陽性表達率在患者年齡、性別、腫瘤大小分組中的差異均無統計學意義(P>0.05);在不同的Dukes分期和分化程度分組中Claudin-2的陽性表達率差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。表2 大腸癌組織中Claudin-2表達與臨床病理特征之間的關系

　3 討論

　　腫瘤的發生、發展是一個由多基因參與和受多因素影響的復雜過程，目前普遍認為細胞間的黏附力減弱或喪失可導致細胞間連接的破壞，并與腫瘤的浸潤轉移密切相關[5]。細胞間的黏附形式主要有以下幾種：緊密連接(TJs)、縫隙連接和黏附連接等。現已證明，緊密連接是腸上皮細胞間主要的連接方式，并有多種蛋白質參與其形成，包括閉鎖(occludin)蛋白、Claudins蛋白、zo-na occludens(ZOs)蛋白以及連接黏附分子(JAM)等。

　　Claudins蛋白是一種相對分子量約為17×103～27×103的跨膜蛋白，目前，已發現至少有24種異構體[6]。Claudins蛋白主要分布于腦、皮膚、神經系統和內臟組織中，其表達有組織特異性，大部分組織中表達兩種以上的Claudins，并且在不同組織中Claudins的成員蛋白是不同的。它的功能主要是組成緊密連接的通透屏障，調控離子、大分子和細胞穿過旁細胞途徑的通透性。

　　我們應用免疫組織化學技術檢測了Claudin-2在大腸癌組織、癌旁組織和正常組織中的表達，結果顯示Claudin-2在大腸癌組織中的陽性表達率為68.57%，較癌旁組織和正常組織中的陽性表達率明顯增高，差異有統計學意義(P<0.05)，表明Claudin-2在大腸癌組織中表達上調。近來研究顯示，Claudins在許多腫瘤中表達異常，Montgomery等[7]利用免疫組化發現Claudin-3、4、7在胃腺癌、食管癌及胃黏膜分化不良細胞、Barrett’s食管中表達較正常組織增高。Kominsky等[8]證實了Claudin-3、4在乳腺癌中均呈高表達。然而，也有研究顯示Claudins在某些部位腫瘤組織中的表達是下調或不表達的。比如， Soini[9]通過免疫組化發現， Claudin-2在前列腺癌、乳腺癌中，Claudin-3在腎癌、膀胱癌中的表達均是下調的。Claudin-7在乳腺浸潤癌中的表達缺失[10]。但claudins蛋白在惡性腫瘤組織中的表達無論高或低，最終總會引起緊密連接的正常結構破壞，從而引起細胞間分子異常側向擴散、細胞極性消失等一系列變化，導致更多的營養物質和其他因子供腫瘤生長。因此，Claudin-2在大腸癌組織中的高表達可能與大腸癌的發生發展有關。工程師論文發表

　　在本次研究中，我們還分析了Claudin-2蛋白的表達與大腸癌各臨床病理特征的關系，結果表明Claudin-2蛋白在不同Dukes分期、分化程度的大腸癌組織中的表達差異有統計學意義(P<0.05);Dukes分期越晚、分化程度越低，Claudin-2的陽性表達率越高。表明隨著腫瘤的進展Claudin-2在大腸癌組織的表達會增強。由此推測，Claudin-2在大腸癌組織中的高表達可能導致大腸黏膜相鄰腸上皮細胞間連接的完整性破壞，緊密連接完整性破壞可能是腫瘤侵襲和轉移的一個重要步驟。

　　綜上所述，Claudin-2在大腸癌組織中呈高表達，其表達異常可能與人大腸癌的發生發展及侵襲轉移密切相關，但確切的發病機制仍有待于進一步研究。

【參考文獻】
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　　[10] Kominsky SL, Argani P, Korz D, et al. Loss of the tight junction protein claudin27 correlates with histological grade in both ductal carcinoma in situ and invasive ductal carcinoma of the breast[ J ]. Oncogene, 2003, 22 (13) : 2021.工程師論文發表