Claudin-2在大腸癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

【摘要】  目的 觀察緊密連接蛋白 Claudin-2在大腸癌組織中的表達(dá)及其與大腸癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。方法 運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)Claudin-2在大腸癌及癌旁組織、正常組織中的表達(dá)，并分析Claudin-2蛋白表達(dá)與大腸癌臨床各病理特征的關(guān)系。結(jié)果 Claudin-2在大腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織及正常組織(P<0.05)。Claudin-2在大腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的分化程度、Dukes分期密切相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 大腸癌與癌旁組織及正常組織相比，Claudin-2表達(dá)陽(yáng)性率明顯升高，其改變?cè)诖竽c癌的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用。

【關(guān)鍵詞】  緊密連接蛋白;大腸癌;免疫組織化學(xué)

　大腸癌是臨床上最常見的消化道惡性腫瘤之一，嚴(yán)重地威脅著人類的健康。大腸癌的發(fā)病率男女均處于惡性腫瘤的第 3 位，其中在西方發(fā)達(dá)國(guó)家，大腸癌的發(fā)病率處于第 2 位[1-2]，在我國(guó)病死率列癌癥死因的第5位[3]。目前，大腸癌的病因和發(fā)病機(jī)制尚無(wú)明確定論，因此從分子水平研究大腸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找與大腸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的致病因素，以達(dá)到早期預(yù)防、早期診斷、早期治療的目的，提高5年生存率具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

　　緊密連接是細(xì)胞之間主要的黏附形式之一，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，保持上皮細(xì)胞的極性，調(diào)節(jié)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、增殖、分化，以及細(xì)胞功能的發(fā)揮均起重要作用。近年已證實(shí)claudins蛋白是構(gòu)成緊密連接的主要骨架蛋白[4]，其異常表達(dá)可能在多種疾病的發(fā)病過(guò)程中起重要作用。目前研究較多的有claudin-1,-3,-4,-7和-16等，對(duì)于Claudin-2卻鮮有報(bào)道。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)大腸癌、癌旁及正常組織中Claudin-2進(jìn)行檢測(cè)，觀察其在大腸癌組織中的表達(dá)。

　　1 材料與方法工程師論文發(fā)表

　　1.1 臨床資料 選自寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院2008年11月-2009年6月間，經(jīng)病理證實(shí)為大腸癌的手術(shù)標(biāo)本35例。其中，男19例，女16例，年齡25～82歲。高分化腺癌9例，中分化腺癌16例，低分化腺癌10例。Dukes分期：A期3例，B期12例，C期16例，D期4例。腸管離體后立即取材，每例標(biāo)本癌組織取1塊，癌旁組織(距腫瘤切緣外3 cm)1塊，正常組織(距腫瘤10cm以上)1塊。各約0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm大小。全部病例術(shù)前均未行放、化療，臨床病例資料完整。

　　1.2 試劑與儀器 一抗：鼠抗人claudin抗體(Zymed公司，美國(guó));S-P免疫組化染色試劑盒(即用型免疫組化ElivisionTMplus廣譜試劑盒)購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司;PBS液(pH7.4);95%乙醇;10%PLL;石蠟切片機(jī)(LEICAKM2245切片機(jī)，德國(guó));脫水機(jī)(LEICAKM300，德國(guó));Nikon eclipse E800顯微鏡(日本產(chǎn))。

　　1.3 免疫組化 標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，5mm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、水化，用常規(guī)S-P法進(jìn)行免疫組織染色，分別檢測(cè)Claudin-2在大腸癌組織、癌旁組織和正常大腸組織中的表達(dá)。一抗為鼠抗人Claudin-2抗體，嚴(yán)格依照試劑盒使用說(shuō)明操作。

　　1.4 免疫組化陽(yáng)性結(jié)果的判定 所有石蠟切片由兩名病理科醫(yī)師獨(dú)立評(píng)判后綜合評(píng)定。Claudin-2蛋白陽(yáng)性反應(yīng)為在細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%時(shí)記為(-)，26%～50%為(+)，51%～75%為(++)，>75%為(+++)。

　　1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　2.1 Claudin-2在大腸癌組織、癌旁組織及正常組織中陽(yáng)性表達(dá)的免疫組化結(jié)果

　　免疫組化染色結(jié)果顯示，大腸癌組織中Claudin-2陽(yáng)性染色為棕黃色，主要定位于細(xì)胞漿中。Claudin -2在大腸癌組織、癌旁組織及正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為68.57%(24/35)、42.86% (15/35)和25.71% (9/35)，見圖1-6(封4)。Claudin-2在大腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織和正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。表1 Claudin-2在大腸癌、癌旁組織及正常組織中的表達(dá)

　　2.2 大腸癌組織中Claudin-2表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系

　　大腸癌組織中Claudin-2陽(yáng)性表達(dá)率在患者年齡、性別、腫瘤大小分組中的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);在不同的Dukes分期和分化程度分組中Claudin-2的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。表2 大腸癌組織中Claudin-2表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

　3 討論

　　腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)由多基因參與和受多因素影響的復(fù)雜過(guò)程，目前普遍認(rèn)為細(xì)胞間的黏附力減弱或喪失可導(dǎo)致細(xì)胞間連接的破壞，并與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5]。細(xì)胞間的黏附形式主要有以下幾種：緊密連接(TJs)、縫隙連接和黏附連接等�，F(xiàn)已證明，緊密連接是腸上皮細(xì)胞間主要的連接方式，并有多種蛋白質(zhì)參與其形成，包括閉鎖(occludin)蛋白、Claudins蛋白、zo-na occludens(ZOs)蛋白以及連接黏附分子(JAM)等。

　　Claudins蛋白是一種相對(duì)分子量約為17×103～27×103的跨膜蛋白，目前，已發(fā)現(xiàn)至少有24種異構(gòu)體[6]。Claudins蛋白主要分布于腦、皮膚、神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)臟組織中，其表達(dá)有組織特異性，大部分組織中表達(dá)兩種以上的Claudins，并且在不同組織中Claudins的成員蛋白是不同的。它的功能主要是組成緊密連接的通透屏障，調(diào)控離子、大分子和細(xì)胞穿過(guò)旁細(xì)胞途徑的通透性。

　　我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了Claudin-2在大腸癌組織、癌旁組織和正常組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示Claudin-2在大腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為68.57%，較癌旁組織和正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明Claudin-2在大腸癌組織中表達(dá)上調(diào)。近來(lái)研究顯示，Claudins在許多腫瘤中表達(dá)異常，Montgomery等[7]利用免疫組化發(fā)現(xiàn)Claudin-3、4、7在胃腺癌、食管癌及胃黏膜分化不良細(xì)胞、Barrett’s食管中表達(dá)較正常組織增高。Kominsky等[8]證實(shí)了Claudin-3、4在乳腺癌中均呈高表達(dá)。然而，也有研究顯示Claudins在某些部位腫瘤組織中的表達(dá)是下調(diào)或不表達(dá)的。比如， Soini[9]通過(guò)免疫組化發(fā)現(xiàn)， Claudin-2在前列腺癌、乳腺癌中，Claudin-3在腎癌、膀胱癌中的表達(dá)均是下調(diào)的。Claudin-7在乳腺浸潤(rùn)癌中的表達(dá)缺失[10]。但claudins蛋白在惡性腫瘤組織中的表達(dá)無(wú)論高或低，最終總會(huì)引起緊密連接的正常結(jié)構(gòu)破壞，從而引起細(xì)胞間分子異常側(cè)向擴(kuò)散、細(xì)胞極性消失等一系列變化，導(dǎo)致更多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和其他因子供腫瘤生長(zhǎng)。因此，Claudin-2在大腸癌組織中的高表達(dá)可能與大腸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。工程師論文發(fā)表

　　在本次研究中，我們還分析了Claudin-2蛋白的表達(dá)與大腸癌各臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果表明Claudin-2蛋白在不同Dukes分期、分化程度的大腸癌組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Dukes分期越晚、分化程度越低，Claudin-2的陽(yáng)性表達(dá)率越高。表明隨著腫瘤的進(jìn)展Claudin-2在大腸癌組織的表達(dá)會(huì)增強(qiáng)。由此推測(cè)，Claudin-2在大腸癌組織中的高表達(dá)可能導(dǎo)致大腸黏膜相鄰腸上皮細(xì)胞間連接的完整性破壞，緊密連接完整性破壞可能是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要步驟。

　　綜上所述，Claudin-2在大腸癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)異�？赡芘c人大腸癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但確切的發(fā)病機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】
  　　[1] Peto J. Cancer epidemiology in the last century and the next decade[J]. Nature，2001，411:390- 395.

　　[2] Tsukuma H, Ajiki W. Descriptive epidemiology of colorectal can-cer-international comparison[J]. Nippon Rinsho，2003，61:25- 30.

　　[3] 王繼恒,李世榮.我國(guó)結(jié)直腸癌篩查和早期診斷十年回顧:1994-2005 [J].胃腸病學(xué), 2006, 11(4):245-250.

　　[4] HeiskalaM, Peterson PA,Yang Y.The roles of claudin superfamily proteins in paracellular transport[J].Traffic, 2001, 2(2): 93-98.

　　[5] Kominsky SL. Claudins: emerging targets for cancer therapy [J]. Expert Rev Mol Med，2006, 8(18): 1- 11.

　　[6] Laural Mitic, Christina M, Van Itallie,et al. MolecularPhysiol-ogy and Pathophysiology of Tight Junctions I. Tight junction structure and function: lessons from mutant animals and proteins[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2000, 279(2):G250-G254.

　　[7] Montgomery E, Mamelak AJ, Gibson M, et al. Overexpression of claudin proteins in esophageal adenocarcinoma and its precursor lesions[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2006,14:24-33.

　　[8] Kominsky SL, Vali M, Korz D, et al. Clostridium perfringens enterotoxin elicits rapid and specific cytolysis of breast carcinoma cells mediated through tight junction proteins claudin 3 and 4[J]. Am J Pathol, 2004,164:1627-1633.

　　[9] Soini Y. Expression of claudins 1,2,3,4,5 and 7 in various types of tumours[J]. Histopathology,2005, 46: 551-560.

　　[10] Kominsky SL, Argani P, Korz D, et al. Loss of the tight junction protein claudin27 correlates with histological grade in both ductal carcinoma in situ and invasive ductal carcinoma of the breast[ J ]. Oncogene, 2003, 22 (13) : 2021.工程師論文發(fā)表