青牛膽急性毒性實驗性研究

【摘要】  目的：采用海南青牛膽莖提取物，通過對小鼠急性毒性實驗及安全性研究，作出初步評價。方法：取KM小鼠50只，雌、雄各半，10只做預試驗，另40只按同性別隨機分為雌、雄空白對照組(蒸餾水組)和藥物組，每組各20只。對小鼠空腹經口灌胃給予青牛膽提取物分別為人臨床用量的200倍、400倍和600倍劑量，觀察小鼠出現的毒性反應及有無死亡。結果：觀察7 d，未見小鼠死亡，所有受試小鼠毛色光潔,活動、飲食和二便正常,兩組經t檢驗,差異無統計學意義(P>0.05)。結論：海南青牛膽未見有明顯毒性反應，表明本品安全性較高。

【關鍵詞】  青牛膽;提取物;急性毒性實驗;海南省教師職稱論文發表

　　[ABSTRACT] Objective: To eva luate the safety of tinospora hainanensis. Methods: 200, 400 and 600 times of clinical dosage of tinospora hainanensis extraction were administered to rats by intragastric administration. Acute toxicity reactions and death were recorded. Results: During 7 days of administration, all rats ate, and discharged normally, kept normal figure and movement. No death was observed. There is no significant difference between the dispersing liver and improving eye�瞫ight and the distilled water group (P>0.05). Conclusion: No obvious toxicity reactions were observed and tinospora hainanensis is pretty safe.

　　[KEY WORDS] Tinospora hainanensis; Extraction; Acute toxicity test; Hainan Province

　　海南青牛膽(Tinospora hainanensis H.S.Lo et Z.X.Li)系防己科青牛膽屬植物，為海南特有種[1]，在民間廣泛用以治療關節疼痛和筋骨損傷。具有鎮痛、松筋、抗炎和抗菌的功效[2]。近年來海南青牛膽藥效物質的研究已取得重大進展。通過經典柱色譜的分離，結合體外細胞學實驗研究，確定了該復方有效部位為植物總甾酮類化合物，既可顯著地抑制鈣的流失和促進成骨細胞的形成，亦可改善因鈣流失或成骨細胞合成受阻而造成的骨質疏松[3]。為進一步挖掘海南青牛膽的藥用價值，確保其安全性，根據中藥臨床前毒理學評價的指導原則，筆者對海南青牛膽提物進行了急性毒性試驗研究, 為開發利用海南青牛膽資源提供了科學根據。

　　1 材料與方法

　　1.1 實驗材料教師職稱論文發表

　　1.1.1 藥物來源 實驗用藥為醇提海南青牛膽。以95%乙醇回流3次，合并提取液后濃縮，產率為20.13%。

　　1.1.2 動物 KM小鼠50只，體重18～22 g，雌雄各半，由長沙市開福區中創實驗動物科技服務部提供。湖南省實驗動物質量合格證第002478號。

　　1.2 方法

　　1.2.1 預實驗劑量確定 為探討其急性毒性,在預試灌胃測不出LD50的情況下,進行了小鼠最大耐受試驗最低劑量組定為6 g/kg，用10只小鼠(雌雄各半)做預試,經觀察后,小鼠無一例死亡,也未出現任何中毒現象。故此劑量為安全劑量,經計算可得,此劑量為成人日用量的100倍。將最大濃度溶液(能夠用灌胃針頭注射為標準)的濃度定為最高劑量組36 g/kg。

　　1.2.2 急性毒性實驗 取KM小鼠40只，雌雄各半，隨機分成空白組與藥物組(按同性別分組), 采用空腹經口灌胃給藥，各組藥物濃度不同, 灌胃體積相同, 均為每只給藥 0.5 mL, 一次性給藥，灌胃前禁食12 h, 但不禁水。蒸餾水作為空白對照。每日3 次給藥，間隔8 h，然后觀察小鼠的死亡、中毒及活動情況,并記錄小鼠的體重、飲食變化。連續觀察1 周。
　1.2.3 觀察指標 給藥后密切觀察12 h，并詳細記錄觀察結果，以后每天上午8～ 9時及下午 3～ 4 時各觀察1 h, 并記錄觀察結果，對其中死亡的動物立即進行尸體解剖檢查。連續觀察7 d，神經系統方面:(1)行為及反應(包括不正常叫聲、煩躁、不安等);(2)運動(包括肌肉抽搐、僵硬、強迫運動等);(3)瞳孔及分泌物(瞳孔有無縮小或放大、流淚等);(4)呼吸及心血管:呼吸急促或過緩、鼻分泌、觸心前區心率快慢等;(5)胃腸方面:腹部脹氣或收縮、大便堅硬或濕等;(6)泌尿生殖系統:陰唇、乳腺腫脹、會陰部骯臟;(7)皮膚和毛:顏色、完整性、有否充血、發疹等;(8)眼:眼瞼下垂、眼球突出、震顫等。每天稱食量。

　　1.3 統計學處理教師職稱論文發表

　　數據的比較采用t檢驗，檢驗水準α=0.05。

　　2 結果

　　給藥后，連續觀察7 d，小鼠無出現死亡情況。其中前2 d大便略稀，活動較弱，以后恢復正常。其他未出現明顯的中毒現象。處死后解剖觀察其心、肝、脾、肺、腎，均無特殊改變。我們記錄了小鼠每天的飲食和體重的變化情況，具體數據見圖1、2、3和表1。

　　經檢驗，雄性、雌性小鼠體重空白組與給藥組差異均無統計學意義(P>0.05),小鼠的體重和飲食均增長，可見此藥對小鼠并無明顯的毒副作用。由實驗可知，海南青牛膽以最大給藥量給藥，小鼠不出現死亡和明顯的中毒情況，此時，小鼠的日用劑量為36 g/kg，相當于生藥180 g/kg，為臨床成人日用劑量600倍以上，故海南青牛膽的安全性較高。表1 最大給藥量(MTD)測定

　　3 結論教師職稱論文發表

　　對海南青牛膽所進行的急性毒性實驗表明,該藥的毒性作用極小。用LD50已不能測出其毒性，故只能以最大給藥量代之。最大給藥量的耐受倍數反映了該藥的安全性，本藥的最大給藥量的耐受倍數相當于臨床擬用日劑量的600倍以上，表明其毒副作用已相當微弱，從毒副作用的角度來看，該藥是安全的，為臨床的安全使用提供了科學依據。

【參考文獻】
  　1 羅獻瑞，趙素云.中國防已科資料[J].廣西植物，1986，6:51.

　　2 季宇彬.中藥有效成分藥理與應用[M].哈爾濱:黑龍江科學出版社，1995.26��26，146��146,270��270,336��336,347��347,461��461.544��544.

　　3 劉明生.海南青牛膽植物總甾酮的醫藥用途及其制備方法:中國，ZL02128429.6[P].2005��02��23.教師職稱論文發表