YAP在乳腺癌中的表達及其臨床意義

【摘要】  　　目的：探討YAP在乳腺癌組織中的表達及與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系及其臨床意義。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測60例乳腺癌組織、26例癌旁正常乳腺組織YAP的表達情況。結(jié)果： 60例乳腺癌組織中有20例為陽性，占33.33%，而在26例正常乳腺組織中有25例為陽性，占96.15%。兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=28.7，P<0.0001)；乳腺癌中YAP的陽性表達與年齡、組織學(xué)分級、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無明顯關(guān)系（P>0.05）。結(jié)論：YAP的表達與乳腺癌形成相關(guān)，有可能是乳腺癌形成早期的一個標志。

【關(guān)鍵詞】  乳腺癌;YAP; 免疫組織化學(xué)

　　［ABSTRACT］ Objective:  To study the expression of YAP and its clinical significance in breast carcinoma. Methods: The expression of YAP was detected by immunohistochemistry in 60 breast carcinoma tissues, 20 carcinoma adjacent normal breast tissue. Results:The positive expression of YAP was found in 20/60 (33.33%) of breast carcinoma tissues ,25/26 (96.15%)of carcinoma adjacent normal breast tissue. The positive expression rate of YAP in breast carcinoma tissues was significantly lower than that in carcinoma adjacent normal breast tissue(χ2=28.7，P<0.0001). No significant relationships were observed among the positive expression of YAP and age，histological grade，tumor  with lymph node metastases, TNM stages of the cancer （P>0.05）. Conclusions: YAP may be implicated in the tumorigenesis of breast carcinoma as an early sign.
   
　　［KEY WORDS］ Breast cancer; YAP; Immunohistochemistry

　　YAP(Yes—assoeiatedprotein)即Yes相關(guān)蛋白，是一種連接蛋白和轉(zhuǎn)錄共激活因子，在正常機體細胞內(nèi)發(fā)揮著信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的作用。近年研究發(fā)現(xiàn)，YAP是Hippo通路中的靶因子，該通路通過抑制YAP的活性調(diào)控細胞增生和凋亡間平衡，抑制組織細胞過度生長。YAP的表達增高、活性增強促進了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，提示其潛在的致癌性。我們通過對乳腺癌手術(shù)標本進行YAP抗體的免疫組化觀察, 對YAP在乳腺癌中的表達與臨床病理特征的關(guān)系進行探討。

　　1  資料與方法

　　1.1  臨床資料
   
　　選取我院2003～2005 年間因乳腺癌行根治術(shù)或改良根治術(shù)的病理標本60例,均為女性,年齡30～73 歲,平均年齡51 歲。病理類型:浸潤性導(dǎo)管癌48例,非浸潤性導(dǎo)管癌12例。TNM 臨床分期為0～I期9例, Ⅱ期20例, Ⅲ～IV期31例；對照組選癌旁經(jīng)病理確診為正常乳腺組織的標本26例,均為女性,年齡18～42 歲,平均年齡30 歲。

　　1.2　方法職稱發(fā)表論文 
   
　　YAP檢測采用SP免疫組織化學(xué)方法。YAP兔抗人多克隆抗體購自北京中杉金橋生物公司，免疫組化SP試劑盒均購于北京中杉金橋生物公司。切片常規(guī)脫蠟和水化后, PBS漂洗3次,每次3min;于濕盒內(nèi)用3%過氧化氫溶液(A液)室溫孵育10min,滴加5%～10%封閉用正常動物非免疫血清工作液(B液)。滴加一抗工作液,YAP于37 ℃孵育箱內(nèi)孵育12h, PBS漂洗3次,每次3min。滴加生物素標記二抗工作液(C液) ;滴加辣根過氧化物酶標記的鏈酶卵白素工作液,配制新鮮的DAB顯色劑。蘇木素復(fù)染細胞核,染色時間2min。

　　1.3  結(jié)果判斷
   
　　YAP的結(jié)果分析按照說明書的標準進行:采用半定量的方法，光鏡下分析，在排除非特異性染色的前提下，以黃色、棕黃色、棕褐色為陽性，計分方法:（1）按切片中細胞顯色深淺評分，0分為無著色； 1分:細胞染色呈淺黃色；2分:細胞染色呈棕黃褐色。（2）按切片中陽性細胞比例評分，每例隨機觀察5個視野，每個視野100個細胞，計數(shù)500個細胞中染色陽性細胞數(shù):1分:陽性細胞數(shù)目≤10%；2分:顯色細胞占11%～50%；3分:顯色細胞占51%～75%；4分:75%以上的細胞著色。每例細胞染色積分=（1）×（2），按照積分分值可以分為:陰性表達或無表達（-），0～3分;陽性表達（+），4～8分。

1.4  統(tǒng)計學(xué)處理
      
　　所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗對各組YAP、P73陽性表達率之間的差異進行統(tǒng)計比較，計算χ2值和P值，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)性分析，檢驗水準為α=0.05。

　　2  結(jié)果
    核心期刊發(fā)表論文
　　YAP陽性染色主要定位于細胞核，顯示為棕黃色或棕色顆粒沉著（見圖1a～d），60例乳腺癌組織中有20例為陽性，占33.33%，而在26例正常乳腺組織中有25例為陽性，占96.15%。兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (χ2=28.7，P<0.0001)。

　　乳腺癌中YAP的陽性表達與年齡組織學(xué)分級、TNM分級淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無明顯關(guān)系（P＞0.05）。見表1。表1  乳腺癌組織中YAP的表達與臨床病理學(xué)指標、ER及PR之間的關(guān)系（略）

　　3  討論
   
　　本文應(yīng)用免疫組化法檢測YAP蛋白在乳腺癌組織的表達, 并分析其與乳腺癌臨床病理特征、ER和PR的關(guān)系, 為揭示乳腺癌生物學(xué)特征提供科學(xué)依據(jù)。
   
　　YAP是一種多功能的細胞內(nèi)連接蛋白和轉(zhuǎn)錄共激活因子。于1994年首次發(fā)現(xiàn)其綁定于非受體酪氨酸蛋白激酶Src家族成員c�瞃es的SH3基序，將其命名為Yes相關(guān)蛋白［1］。YAP在正常機體內(nèi)參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。近年研究發(fā)現(xiàn)，YAP在一些腫瘤組織細胞中表達增高、活性增強，推測其可能作為致癌因子參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。 Udan等［2］研究發(fā)現(xiàn)YAP與腫瘤的形成和控制組織器官的大小關(guān)系密切,可能成為區(qū)別腫瘤良惡性、惡性程度及預(yù)測轉(zhuǎn)移、預(yù)后的指標。Xu等［3］研究發(fā)現(xiàn)YAP在肝癌中呈現(xiàn)高表達，并且與血清中AFP的表達和腫瘤的分化相關(guān)，是肝癌患者的總生存率和無