腫瘤標志物診斷早期原發性肝癌的研究與應用進展

【關鍵詞】  腫瘤標志物;原發性肝癌;甲胎蛋白;綜述文獻

　　原發性肝癌(primary hepatic cancer， PHC)是一種惡性程度較高、進展較快、預后較差的惡性腫瘤，肝細胞癌(hepato�瞔ellular carcinoma，HCC)占其絕大部分，其死亡率僅次于胃癌、食道癌，居第3位。我國每年死于肝癌約11萬人，其中男性8萬人，女性3萬人，占全世界肝癌死亡人數的45%[1]。因其初期癥狀并不明顯，發現時已多處于晚期，而晚期患者多因癌細胞擴散和轉移導致預后不良。因此早期診斷和手術治療是提高肝癌患者5年生存率的關鍵。目前早期診斷主要是通過檢測血清肝癌標志物，及時發現亞臨床期的肝癌，然后進行早期切除加以積極綜合治療，所達到的遠期效果及五年生存率才能有顯著提高。

　　腫瘤標志物(tumor markers, TM)是指存在于腫瘤細胞內或腫瘤細胞表達及脫落的物質，或是宿主對于體內腫瘤反應而產生的物質[2，3]。其存在于細胞胞質、胞核中或細胞膜表面，也可見于循環血液、其他體液或組織中。這些物質，有的只在腫瘤患者體內出現，有的在腫瘤患者體內含量超過正常人體內含量。通過化學、免疫學及基因組學等方法測定其存在及含量，可間接反映腫瘤的存在并為分析病程、監測療效和復發、判斷預后提供依據。 在原發性肝癌(以下簡稱肝癌)早期診斷發展史中，甲胎蛋白(AFP)開創了肝癌免疫診斷的先河，使亞臨床肝癌診斷成為可能，并掀起了腫瘤標志物研究的熱潮。然而根據近年來統計分析發現，肝癌的早期診斷僅靠這一指標有一定局限性，其陽性率為70%～90%，還有10%～30%的肝癌病例不能早期檢出[4]。因此，聯合AFP等多種腫瘤標志物發現早期肝癌已經成為當前最簡單有效的方法。本文就幾種主要TM在肝癌早期診斷中的研究與應用進展做一綜述。

　　1 甲胎蛋白

　　甲胎蛋白(alpha�瞗etal protein， AFP)是最早發現診斷PHC并具器官特異性的腫瘤標志物, 可在出現臨床癥狀8～11個月前呈陽性, 但在PHC 患者中呈陰性或低濃度陽性占30%～ 40%[4]。其原因可能與一些肝組織為不分泌AFP 的細胞株、纖維板層狀肝癌以及肝癌早期AFP 分泌少, 還與腫瘤體積大小、 分化程度、生長情況、變性壞死及其生物學特性等有關。PHC患者AFP呈陰性或低濃度陽性的原因尚無定論[5，6]。部分良性肝病患者AFP 呈低濃度陽性, 少數A FP>400μg/L。其原因可能為肝細胞炎性壞死，受損的肝細胞再生幼稚化，重新具有產生AFP 的能力。這說明A FP 對PHC 診斷有局限性, 故探討腫瘤標志物聯檢對AFP< 400μg/L的PHC診斷有較大臨床價值[7]。

　　2 肝癌特異性γ�补劝滨＾D移酶(HS�睪GT)、GGTmRNA�睭亞型

　　肝癌患者血清γ�补劝滨＾D移酶(GGT)活性顯著升高，但特異性較差，大多數良性肝、膽、胰疾病患者GGT活性也可增高。應用聚丙烯酰胺梯度凝膠電泳可將GGT分成1～12條區帶,其中Ⅱ、Ⅰ′ 、Ⅱ′被稱為肝癌特異性GGT(HS�睪GT)。對AFP假陰性肝癌(<50μg/L)和小肝癌的診斷率分別為84.0%，78.6%(AFP僅為50%)。與AFP濃度或腫瘤大小無明顯相關[8]。Morsi等[9]通過篩選認為HS�睪GT等可作為 AFP以外的最佳肝癌標志物。隨著對 GGT基因的深入研究，GGTmRNA可望成為檢測肝細胞早期癌變的靈敏方法。肝GGT基因可分為3 種亞型：即胎肝(F)、胎盤(P)和肝癌細胞(H)亞型,其中H亞型陽性可能為肝細胞的癌前期病變，有必要監測觀察[10]。秦成坤等[11]通過臨床試驗亦證實其有助于肝癌的早期診斷。

　　3 異常凝血酶原

　　異常凝血酶原(abnormal prothrombin, APT)系肝臟合成的凝血酶原前體入血，肝癌組織表面羧化酶基因的表達可使APT積聚增加，但不能使APT轉化為具有凝血活性的凝血酶原。對APT水平在 30～40mAu/mL患者，若影像學未見明顯異常，應密切動態監測APT水平，了解是否有發展為肝癌的可能[12]。一般認為APT為陽性率高、特異性強的肝細胞癌標志，可作為早期肝細胞癌的診斷指標[4]。

　　4 α�睱�矌r藻糖苷酶

　　α�睱�矌r藻糖苷酶(α�睱�瞗ucosidase, AFU)是存在于多種組織中的一種溶酶體酸性水解酶，其對早期肝癌診斷的特異性達82.6%(AFP 68.6%)[13]，國內外均有學者報道AFU水平的檢測對肝癌尤其是AFP陰性或低水平的肝癌具有較高診斷價值，它已被作為一種新型的腫瘤標志物加以應用[14]。

　　5 血清鐵蛋白

　　血清鐵蛋白(serum ferritin, SF)主要由肝細胞合成，當肝癌擠壓肝細胞使之壞死或肝癌伴有肝硬變時，肝臟處理循環血中 SF能力下降，引起血清SF升高[15]。近來研究發現，作為肝癌診斷標志，血清鐵蛋白的敏感性和特異性都優于AFP[4,16]。

　　6 轉化生長因子

　　轉化生長因子β1(transfer growth factor�拨�1，TGF�拨�1)、TGF�拨�1mRNA是一種多功能的細胞因子，與細胞的生長分化相關，其表達增加與肝癌的發生、發展密切相關[17]。動物實驗表明[18]，大鼠肝癌發生發展過程中TGF�拨�1和TGF�拨�2表達逐漸升高，肝癌發生前肝臟損傷和肝硬化階段TGF�拨�1相對正常組織明顯升高，出現肝癌之后的大鼠肝臟的TGF�拨�1表達則相對于正常肝臟和肝癌前期的肝臟損傷和肝硬化階段都有非常明顯的表達升高。TGF�拨�1的上述變化可以作為觀察指標，通過檢測TGF�拨�1及其受體的含量診斷和監測肝硬化和肝癌的不同階段。亦有研究表明[19-21]，從人肝癌癌灶、癌周組織和外周血單核細胞中以巢式聚合酶鏈反應擴增和 DNA測序證實其擴增片段為TGF�拨�1mRNA。所擴增基因片段檢出率，癌灶和癌周組織中分別為100%，46.2%;肝癌組外周血中為53.3%，明顯高于肝硬化組 20.0%和慢性肝炎組5.0%，其他組未見擴增片段檢出;3期肝癌組為83.3%，高于1期和2期，TGF�拨�1mRNA過度表達與肝癌形成有關，它的分析有助于肝癌診斷和遠處轉移的監測，且與AFP濃度及腫瘤大小間無明顯相關性，可提高AFP陰性肝癌早期診斷陽性率[22]。

　　7 磷脂酰基醇蛋白聚糖��3、GPC��3mRNA

　　磷脂酰基醇蛋白聚糖��3(glypican��3，GPC��3)、GPC��3mRNA 是一種硫酸類肝素蛋白多糖，它在絕大多數肝癌患者中表達，而在正常肝組織及良性肝臟病變中不表達[23]。Capurro等[24]測得53%肝癌患者血清中存在GPC��3的C端片段，而在健康對照組中無一陽性。另外Nakatsura、Hippo等[25-29]證明，GPC��3的表達與腫瘤組織的分級及大小無關，與AFP無關聯性。因此，在臨床上檢測GPC��3可以對肝癌患者進行早期診斷，對AFP陰性肝癌患者有較高的敏感性。

　　8 高爾基體蛋白73、GP73異質體

　　高爾基體蛋白(Golgi protein73，GP73)是存在于高爾基體的一種跨膜蛋白，Kladney 等[30]于2000年首次描述了在正常的人體肝組織中，GP73主要由膽管上皮細胞表達，而肝細胞表達很少甚至不表達。但肝細胞受到病毒感染則可引起GP73的高表達，Block等[31,32]于