P16、P53、PCNA在膀胱癌中的表達及意義

【摘要】  目的:研究P16、P53、PCNA在膀胱癌中表達及其意義。方法:應用免疫組化S-P法檢查52例膀胱癌組織中P53、P16、PCNA表達水平。結果:52例膀胱移行細胞癌中P16、P53、PCNA陽性表達率分別為42.3 %、57.6 %、59.6 %，P16陽性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ級腫瘤中分別為58.8 %、38.5 %和22.2 %，P53陽性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ級腫瘤中分別為41.2 %、57.7 %和88.9 %，PCNA陽性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ級腫瘤中分別為17.3 %、30.8 %和66.7 %；隨著膀胱癌病理分級上升,P16表達陽性率逐漸下降,P53和PCNA陽性率逐漸上升。結論:P16、P53、PCNA的免疫組化檢測具有評估膀胱癌預后的價值。

【關鍵詞】  P16；P53；PCNA；膀胱腫瘤；免疫組織化學

    Abstract  Objective: To study the expression and significance of P16, P53 and PCNA in bladder carcinoma.  Methods: The immunohisto-chemical staining method was used to eva luate the positivity of P16, P53 , PCNA 2 in 52 cases of bladder carcinoma.  Results:  Of 52 cases, P16 was positive in 22 (42.3 %), P53 was positive in 30 (57.6 %)and PCNA positive in 31 (59.6 %). P16 positivity rate in grade I, Ⅱand Ⅲtumors was 58.8 %, 38.5 % and 22.2 % respectively; The P53 positivity rate in grade Ⅰ, Ⅱand Ⅲ tumors was 41.2 % ,57.7 % and 88.9 %,respectively; The PCNA positivity rate in grade Ⅰ, Ⅱand Ⅲtumors was17.3 % ,30.8 % and 66.7 % respectively. P16 positivity rate was significantly lower in the patients  poorly differentiated， but P53 and PCNA positivity rate was significantly higher in the patients poorly differentiated. Conclusion: Immunohisto-chemecal analysis of P16, P53 and PCNA is of some value in eva luating prognosis of bladder cancer.

    Key words  P16; P53; PCNA; Bladder carcinoma; Immunohist-chemistry

    膀胱癌是泌尿系最常見的惡性腫瘤,早期做出正確的診斷對疾病的治療與預后有重要的臨床意義。膀胱癌生物學標記作為膀胱癌的早期診斷、監測以及預后評估的有效手段正受到越來越多的關注。單個癌基因蛋白產物或抗癌基因蛋白產物與膀胱癌發生的相關性研究已有很多報道,而對于同一膀胱癌標本多個癌基因蛋白產物或抗癌基因蛋白產物表達規律的研究報道較少。我們用免疫組化方法檢測膀胱癌中P16、P53、PCNA的表達水平,以探討它們的表達與膀胱癌生物學行為的關系。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料 小學數學論文發表

　　包頭醫學院第一附屬醫院2003年1月至2007年1月間手術切除的膀胱移行細胞癌石蠟包埋組織塊標本69例,其中男29例,女23例，年齡33～80歲,平均55.5歲。本組患者在外科手術之前均未作其他治療。另取5例正常膀胱黏膜為對照組。全部標本均經10 %福爾馬林常規固定,石蠟包埋，作4 μm厚連續切片,分別作HE染色和P16、P53、PCNA免疫組化染色。病理分級按WHO標準:Ⅰ級17例,Ⅱ級26例,Ⅲ級9例。

　　1.2  方法

　　P16、P53、PCNA免疫組化染色采用S-P法,染色步驟按說明書進行。所有試劑盒均為福州邁新生物技術有限公司產品。

　　1.3  染色結果判定

　　P16、P53、PCNA染色陽性細胞表現為細胞核呈棕褐色,輪廓清楚。

　　2  結果

    52例膀胱癌中有22例P16蛋白表達陽性（42.3 %),30例P53蛋白表達陽性（57.6 %),31例PCNA蛋白表達陽性（59.6 %)。對照組膀胱組織中P16、P53和PCNA的表達為100.0 %，0.0 %，0.0 %。P16蛋白在正常膀胱組織中的陽性表達率明顯高于膀胱癌組織中的陽性率，兩者之間差異有統計學意義（P＜0.01)。P53和PCNA蛋白在正常膀胱組織中的陽性表達率明顯低于膀胱癌組織中的陽性率，兩者之間差異均有統計學意義（P＜0.01)。隨著膀胱癌病理分級上升,P16表達陽性率逐漸下降,P53和PCNA陽性率逐漸上升。P16、P53和PCNA在不同級別的膀胱癌中的表達見表1。表1  P16、P53和PCNA在不同級別的膀胱癌中的表達（略）

3  討論圖書館論文發表

    抑癌基因是細胞的正常基因,它們具有抑制細胞生長和腫瘤形成的功能,當一對等位抑癌基因全部丟失或失活時,細胞就可以發生惡變。P53基因位于第17號染色體的短臂上,由11個外顯子和10個內含子組成,正常體細胞P53基因為編碼53 kD的磷酸結合核蛋白,后者又稱為野生型P53蛋白。野生型P53基因是抑癌基因,野生型P53蛋白通過影響基因轉錄,干擾DNA的起始,促進細胞的終末分化程序化死亡而發揮其抑制細胞增殖、轉化,進而阻止細胞癌變。而P53基因突變產物即突變型P53，不僅失去了正常的抑癌作用,而且還有促進細胞惡性轉化的作用，它的積聚與膀胱癌的分級以及腫瘤的增殖和進展密切相關。野生型P53蛋白半衰期僅6～20 min,一般免疫組化方法難以檢測出來,突變型P53蛋白半衰期較長,常在細胞核內聚積,因此,用免疫組化方法檢測到的P53蛋白均為突變型P53蛋白[1]。Carlos等[2]用免疫組化法研究42例膀胱癌,結果發現26例標本中有P53蛋白的高表達。有研究表明P53蛋白陽性表達與膀胱癌生物學行為關系密切，而且隨著腫瘤惡性程度的上升,P53表達陽性率也逐漸上升[3-6]。本實驗研究發現,正常膀胱黏膜中P53蛋白為陰性;膀胱癌P53蛋白陽性率為57.6 %,與國內外報道相似（21.2 %～60 %)。

    p16基因是一種參與細胞周期調控的抑癌基因。它位于9號染色體短臂21區（9p21)上,由3個外顯子和2個內含子組成。p16抑癌基因的編碼產物P16蛋白直接抑制細胞周期素依賴性激酶4（CDK4)的活性,對細胞增殖起負調節作用。CDKS必須在細胞周期中不同時期被激活或失活,細胞才能進行正常分裂,而CDKS只有