冬蟲夏草保健酒對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)影響的研究

【摘要】  目的：研究冬蟲夏草保健酒對小鼠免疫功能的影響。方法：測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)所致的耳部重量的改變。結(jié)果：冬蟲夏草保健酒能增強巨噬細(xì)胞吞噬功能，致敏后小鼠的左右耳重量差異顯著高于對照組。結(jié)論：冬蟲夏草保健酒能增強小鼠特異性細(xì)胞免疫功能和非特異性細(xì)胞免疫功能。

【關(guān)鍵詞】  冬蟲夏草保健酒；小鼠；巨噬細(xì)胞吞噬功能；遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)
    
　　Abstract  Objective:To study the Effect of Cordyceps sinensis conservancy wine on the immune function of mice. Methods:  Ponderal difference was examined in the  left and right ear of the mice caused by the phagocytosis of peritoneal macrophage and delayed allergy. Results: Cordyceps sinensis conservancy wine could improve the phagocytosis of macrophage ,and the ponderal diference between mice,s left and right ear is greater than that in the control group.Conclusion: Cordyceps sinensis conservancy wine can enhance specific cellular immunity and the non-specific immunity.
    
　　Key words  Cordyceps sinensis conservancy wine; Mice; Phagocytosis of peritoneal macrophage; Delayed allergy

　　冬蟲夏草保健酒以冬蟲夏草為主要原料，以紅棗、枸杞等為輔料釀制而成，含有蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、核苷酸、無機元素、超氧化物歧化酶（SOD）等多種成分。近年來雖然關(guān)于冬蟲夏草對機體免疫功能影響的研究很多，但關(guān)于冬蟲夏草與紅棗、枸杞的聯(lián)合作用并未見報道，本文研究這些成分對小鼠免疫功能的共同影響。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料  （1）冬蟲夏草保健酒:由包頭醫(yī)學(xué)院營養(yǎng)食品研究所與包頭某酒廠共同研制；（2）實驗動物：昆明種小鼠，雄性，40只，體重18～22g，由內(nèi)蒙古大學(xué)動物中心提供；（3）姬-瑞氏混合液：按參考文獻[1]的方法配制；（4）雞紅細(xì)胞混懸液：采雞全血，用生理鹽水配制成5%（V/V）的混懸液；（5）二硝基氟苯（DNFB）：由天津新興隆化工廠提供。稱取DNFB 7g，丙酮100mL，配成7%的DNFB丙酮溶液；再稱取DNFB 1g，丙酮100mL，配成1%的DNFB丙酮溶液。

　　1.2  方法經(jīng)濟管理論文發(fā)表

　　1.2.1  實驗動物分組和飼喂  將小鼠按體重隨機分為4組，每組10只，即低劑量組、中劑量組、高劑量組和對照組。低、中、高3個劑量組分別是成人推薦量（每人每天60mL）的5倍（5μL/g）、10倍（10μL/g）和20倍（20μL/g）。各組小鼠均喂飼相同的基礎(chǔ)飼料（由內(nèi)蒙古大學(xué)動物中心提供），實驗前將保健酒經(jīng)真空濃縮20倍，則低、中、高三個劑量組分別變?yōu)?倍（0.25μL/g）、10倍（0.5μL/g）和20倍（1μL/g），再用蒸餾水將濃縮20倍的酒分別稀釋40倍、20倍、10倍，即為低、中、高3個劑量組，3個劑量組動物每日分別經(jīng)口灌胃給予稀釋后的濃縮冬蟲夏草保健酒10μL/g，陰性對照組動物每日經(jīng)口灌胃給予蒸餾水10μL/g。

　　1.2.2  小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的測定  實驗動物飼養(yǎng)30天后，每只小鼠腹腔注射5%雞紅細(xì)胞混懸液0.5mL，18小時后處死動物，仰位固定，腹壁消毒后剪開皮膚，注射2.5mL Hank，s液沖洗腹腔。由腹膜中央剪一小孔，用吸管吸取腹腔沖洗液，滴于載玻片上，37℃溫孵30分鐘，用生理鹽水沖去未貼壁的細(xì)胞，涼干后用甲醇固定5分鐘，再用姬-瑞混合液染色10～15分鐘，用蒸餾水沖去染色液，干燥后在油鏡下計數(shù)200個巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞數(shù)，并計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。即：

　　吞噬百分率=（吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個巨噬細(xì)胞數(shù)）×100%

　　吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/200個巨噬細(xì)胞數(shù)

　　1.2.3  DNFB所致小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)  實驗動物飼養(yǎng)30天后，于第1、第5天每只小鼠后肢皮內(nèi)注射7%DNFB丙酮溶液0.02mL進行致敏，于第1次致敏的第8天，用1%DNFB丙酮溶液0.02mL涂布于右耳進行攻擊，左耳涂布生理鹽水作為對照。次日處死動物，用直徑8mm的打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，稱重并計算左右耳重量的差值進行單因素方差分析。

　　2  結(jié)果

　　2.1  冬蟲夏草保健酒對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響  巨噬細(xì)胞的吞噬功能是反映機體非特異性免疫功能的常用指標(biāo)之一，它反映機體非特異性吞噬多種抗原和抗感染的能力。結(jié)果表明，冬蟲夏草保健酒各劑量組吞噬百分率和吞噬指數(shù)與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且有隨飲用冬蟲夏草保健酒劑量的增加而增高的趨勢，見表1。

　　表1  小鼠腹腔吞噬細(xì)胞雞紅細(xì)胞實驗的吞噬百分率和吞噬指數(shù)比較（略）

　　*與對照組比較P＜0.05,**與對照組比較P＜0.01

　　2.2  冬蟲夏草保健酒對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響  該項實驗是對特異性細(xì)胞免疫功能的測定。結(jié)果表明，冬蟲夏草保健酒各劑量組小鼠右耳經(jīng)1%DNFB丙酮溶液攻擊后明顯腫脹，重量高于左耳，其中、高劑量組左右耳重量的差值明顯高于對照組,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（見表2）。

　　表2  二硝基氟苯誘導(dǎo)小鼠DTH耳重量比較（略）護理論文發(fā)表網(wǎng)論文發(fā)表雜志

　　*與對照組比較,進行單因素方差分析P＜0.05,**與對照組比較P＜0.01

　3  討論
   
　　本研究通過用3個劑量冬蟲夏草保健酒對小鼠免疫作用的影響進行了初步實驗。結(jié)果表明，冬蟲夏草保健酒能促進小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能、使致敏后小鼠的左右耳重量差顯著高于對照組。
    
　　冬蟲夏草保健酒調(diào)節(jié)免疫功能的作用與冬蟲夏草保健酒中成分有關(guān)。冬蟲夏草含蛋白質(zhì)為20.06%～26.40%,含天門冬、蘇、絲、谷、脯、甘、纈、蛋、異亮、亮、酪、苯丙、賴、組、精、胱、半胱、色氨酸等18種氨基酸［2］。蟲草在臨床上的補益、輔助治療消化系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病、抑制病菌及增強免疫功能等作用,似乎與其富含上述氨基酸有必然的聯(lián)系［3］。蟲草所含的多糖均為半乳甘露聚糖，大量藥理實驗表明，蟲草多糖類物質(zhì)具有多種作用，如抗腫瘤、增強單核巨噬細(xì)胞的吞噬能力、提高小鼠血清中IgG的含量、對體外淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化有促進作用和抗輻射作用等［4］。目前已從冬蟲夏草