水產(chǎn)品中丙酸睪酮殘留檢測方法分析

【內(nèi)容摘要】：丙酸睪酮是一種比較典型的睪酮類的衍生物，其主要合成方式是人工合成，根據(jù)其合成的主要物質(zhì)以及其主要的特性特點可以看出，丙酸睪酮是一種具有蛋白質(zhì)活性的同化激素，對于當前的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有重要的作用。因此在這種情況下，對于水產(chǎn)品中丙酸睪酮殘留檢測方法進行研究和分析具有重要的現(xiàn)實意義。
【關(guān)鍵詞】: 水產(chǎn)品 丙酸睪酮 殘留檢測 方法分析
1 水產(chǎn)品中丙酸睪酮殘留的氣相色譜- 質(zhì)譜測定方法分析
1.1 實驗材料
本次試驗采用的實驗材料主要包括三大類，分別是實驗試劑、實驗溶液和實驗樣品，以下將作簡要分析。
本次試驗采用的主要試驗試劑如下：純度≥ 97% 的丙酸睪酮；純度≥ 97% 的諾龍-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。
本次試驗采用的主要食鹽溶液有100μg/mL 的丙酸睪酮標準貯備溶液、諾龍-D3 內(nèi)標貯備液和衍生化試劑、飽和氯化鈉溶液等等。
本次試驗的主要實驗樣品為褐牙鲆、凡納濱對蝦、小黃魚等水產(chǎn)品。
1.2 實驗方法分析
1. 樣品處理
取待測樣品均勻搗碎處理，于冷凍室存儲。先稱取5.00g 樣品于50ml 離心管中，加入工作溶液進行混勻，水浴十分鐘之后， 再冷卻至室溫，加入一定量的叔丁基甲醚，振蕩均勻，進行超聲處理，再進行離心處理，取上清液。
2. 凈化處理
取上清液于-80℃條件下靜置約20 分鐘，然后轉(zhuǎn)移至雞心瓶進行蒸發(fā)處理。再在殘留物中添加乙酸乙酯- 正己烷進行溶解，溶解完畢后再向其中分別加入丙酮和正丁烷3ml、6ml， 倒入固相萃取柱中，準備過柱。采用丙酮- 正己烷作為過柱液， 將洗脫液進行水洗兩次后，吹干。
3. 衍生化處理
取相應(yīng)的衍生化試劑加入凈化處理后的殘渣中，混勻后進行超聲處理，然后烘干，加入正己烷進行定容之后，進行氣相色譜- 質(zhì)譜分析。緊接著就是對于標準溶液進行衍生化處理。
4. 標準曲線的繪制
在保證一定精確性的前提下，取一定量的標準中間液丙酸睪酮與容量瓶中，然后再用甲醇溶液進行稀釋，將標準中間液的濃度分別稀釋成0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1.0μg/ mL，分別去定量按照衍生化處理的處理方法，進行GC 以及MS 測定。然后以配置的標準溶液的濃度為橫坐標，以丙酸睪酮與內(nèi)標衍生物的定量離子峰面積比值的平均值為縱坐標，繪制出相應(yīng)的標準曲線，并根據(jù)標準曲線計算出相應(yīng)的回歸方程和相關(guān)的曲線系數(shù)。
5. 計算回收率、精密度以及確定最低檢測限
1.3 結(jié)果與討論
本次實驗測定共經(jīng)歷了樣品處理、凈化處理、衍生化處理、標準曲線繪制和結(jié)果出來分析等幾個主要階段。過程中采用配置的標準溶液的濃度為橫坐標，以丙酸睪酮與內(nèi)標衍生物的定量離子峰面積比值的平均值為縱坐標，繪制出相應(yīng)的標準曲線具有一定的科學(xué)性。所選擇的回收率、精密度的計算方法也具有很好的說服力和可信度，從實驗的結(jié)果來看，水產(chǎn)品中丙酸睪酮殘留的氣相色譜- 質(zhì)譜測定方法基本可以滿足實際水產(chǎn)品的檢測以及監(jiān)控的基本要求，又有很好的可行性。
2 水產(chǎn)品中丙酸睪酮殘留的液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜測定方法分析
2.1 實驗材料
本次試驗采用的實驗材料主要包括三大類，分別是實驗試劑、實驗溶液和實驗樣品，以下將作簡要分析。
本次試驗采用的主要試驗試劑如下：純度≥ 97% 的丙酸睪酮；純度≥ 97% 的諾龍-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。本次試驗采用的主要食鹽溶液有100μg/mL 的丙酸睪酮標準貯備溶液、諾龍-D3 內(nèi)標貯備液和衍生化試劑、飽和氯化鈉溶液等等。本次試驗的主要實驗樣品為褐牙鲆、凡納濱對蝦、小黃魚等水產(chǎn)品。
2.2 實驗方法分析
1. 樣品前處理
將實驗所選擇的樣品中的魚類的肌肉組織進行搗碎后均勻攪拌，在低溫條件下儲藏。先稱取5.00g 樣品于50ml 離心管中，再加入一定量的標準工作溶液和叔丁基甲醚之后，進行混勻、超聲處理、振蕩處理、離心處理，然后取上層清液分別轉(zhuǎn)移到梨形瓶之中，蒸發(fā)吹干。然后進行復(fù)溶、冷凍、再離心，離心處理之后準備進行液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜測定分析。
2. 標準曲線的繪制
在保證一定精確性的前提下，取一定量的標準中間液丙酸睪酮與容量瓶中，然后再用乙腈-0.1% 甲酸水溶液進行稀釋， 將標準中間液的濃度分別稀釋成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100ng/ml，另外在每一個標準溶液中還要加入一定量的20 ng/mLNT-D3 作為內(nèi)標的在一定條件下進行液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜測定。然后以標準中間液的濃度作為橫坐標，以丙酸睪酮與內(nèi)標衍生物的定量離子峰面積比值的平均值為縱坐標， 繪制標準曲線，并根據(jù)標準曲線計算出相應(yīng)的回歸方程和相關(guān)的曲線系數(shù)。
3. 計算回收率、精密度以及確定最低檢測限
4. 丙酸睪酮的飛行時間質(zhì)譜定性測定
采用1.0 μg/mL 丙酸睪酮標準溶液對LC-MS QTOF 進行碰撞能量、錐孔電壓、等質(zhì)譜條件和流動相組成及梯度等色譜條件進行研究，并確定丙酸睪酮的飛行時間質(zhì)譜測定信息。
2.3 結(jié)果與討論
本次試驗檢測過程中，在HPLC/MS QTOF 色譜質(zhì)譜檢測的基礎(chǔ)上進行了優(yōu)化處理，然后通過丙酸睪酮的飛行時間對于檢測條件進行確定。最后采用內(nèi)標法進行標準溶液的測定，并繪制出了相應(yīng)的標準曲線。水產(chǎn)品中丙酸睪酮殘留的液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜測定方法的主要優(yōu)點就是靈敏度高、準確性好，能夠滿足實際水產(chǎn)品的檢測以及監(jiān)控的基本要求，具有很好的應(yīng)用價值和實用性。
3 兩種檢測方法的比較分析
從這兩種檢測方法的檢測結(jié)果來看，都可以滿足實際水產(chǎn)品的檢測以及監(jiān)控的基本要求，因此都可以應(yīng)用在水產(chǎn)品中丙酸睪酮殘留檢測過程中。但是水產(chǎn)品中丙酸睪酮殘留的氣相色譜- 質(zhì)譜測定方法的前者準備工作比較復(fù)雜，而且實驗步驟較多，因此和液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜測定方法相比，具有浪費時間、難度大的缺點。但在實際的應(yīng)用過程中，兩種檢測方法各有利弊，具體的方法的采用還應(yīng)該根據(jù)實際的費用投入和檢測要求而進行確定，并在檢測過程中進行不斷地優(yōu)化和改善。
4 結(jié)語
在一定條件下，水產(chǎn)品中丙酸睪酮可以很好的提高水產(chǎn)品飼養(yǎng)過程中的飼料的轉(zhuǎn)化率，促進水中動植物的生長，進而提高水產(chǎn)養(yǎng)殖的產(chǎn)量，提高經(jīng)濟效益。但是如果水產(chǎn)品中的丙酸睪酮超過一定含量，那么就會對人體造成一定傷害，影響食品安全， 所以對于丙酸睪酮殘留的檢測方法還應(yīng)該引起足夠的重視。
【參考文獻】：
[1] 田良良, 曹立民, 王建華, 徐杰, 林洪. 水產(chǎn)品中丙酸睪酮激素的同位素稀釋氣相色譜- 質(zhì)譜法分析[J]. 中國漁業(yè)質(zhì)量與標準. 2011(03) .