維生素E抑制3T3�睱1前脂肪細(xì)胞的分化

【摘要】  目的：研究維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響。方法：利用MTT研究維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞增殖的影響，利用油紅O染色法測定維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞分化的影響。結(jié)果：維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞增殖無影響，10 ～100μmol/L維生素E能抑制3T3�睱1前脂肪細(xì)胞的分化。結(jié)論：維生素E對前脂肪細(xì)胞分化具有抑制作用。

【關(guān)鍵詞】  維生素E；碘；3T3�睱1；增殖；分化；肥胖；MTT；油紅O染色法
  

［ABSTRACT］ Objective: To study the effects of vitamin E on proliferation and differentiation of 3T3�睱1 preadipocyte. Methods: The effect of vitamin E on the proliferation of 3T3�睱1 was determined by MTT. Oil red O staining was used to determine the differentiation rate and level of 3T3�睱1 preadipocytes. Results: Vitamin E inhibited the differentiation of preadipocytes at 10 μmol/L and 100 μmol/L. Conclusions: Vitamin E could inhibit the differentiation of 3T3�睱1 preadipocyte.
   
［KEY WORDS］ Vitamin E; Iodine; 3T3�睱1; Proliferation; Differentiation; Obesity; MTT; Oil red staining

 
    維生素E除了具有抑制多元不飽和脂肪酸及磷脂質(zhì)被氧化，保護(hù)細(xì)胞膜的抗氧化作用外，還具有許多非抗氧化的功能。我們以往的實驗中發(fā)現(xiàn)維生素E對營養(yǎng)性肥胖小鼠具有降低體重的作用［1，2］，為了進(jìn)一步研究其作用機(jī)制，本實驗利用3T3�睱1前脂肪細(xì)胞研究維生素E對前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響。

1  材料與方法

1.1  材料

   
DMEM培養(yǎng)基和HEPES購于Gibco公司，胎牛血清購于杭州四季青公司，1�布谆�3�伯惗』�黃嘌呤（1�瞞ethyl��3�瞚sobuthylxanthine，IBMX）、地塞米松（dexamethasone，DEX）、胰島素（insulin）、 油紅O（Oil red）、噻唑藍(lán)（MTT）、維生素E均購于Sigma 公司。

1.2  方法

1.2.1  細(xì)胞培養(yǎng)  3T3�睱1前脂肪細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，在5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中生長，根據(jù)細(xì)胞狀況每2天換一次培養(yǎng)液。3T3�睱1前脂肪細(xì)胞融合達(dá)70%時，胰蛋白酶消化、傳代。

1.2.2  細(xì)胞增殖實驗  將3T3�睱1前脂肪細(xì)胞以5×103的密度接種于96孔
板，分為4組，培養(yǎng)基中維生素E終濃度分別為0、1、10和100μmol/L（對照組及1、10、100μmol/L維生素E組），每組6孔。培養(yǎng)72h后用MTT比色法以波長490nm測定各孔吸光度（OD）值。

1.2.3  細(xì)胞分化實驗  實教育論文發(fā)表期刊
評職稱論文發(fā)表網(wǎng)站 驗分為對照組及1、10、100μmol/L維生素E組，每組6孔。配制誘導(dǎo)培養(yǎng)液為DMEM培養(yǎng)基＋0.5mmol/L的IBMX＋1.0μmol/L DEX+5mg/L的胰島素，配制分化培養(yǎng)液為DMEM培養(yǎng)基＋0.5mmol/L的IBMX＋1.0μmol/L DEX。4組誘導(dǎo)和分化培養(yǎng)液中的維生素E終濃度分別為0、1、10、100μmol/L。將3T3�睱1前脂肪細(xì)胞5×103的密度接種于96孔板。細(xì)胞完全融合后2d（此時為誘導(dǎo)分化的第0天），換為誘導(dǎo)培養(yǎng)液，在第48小時（第2天）后換為分化培養(yǎng)液，第4天及以后的換液不加任何誘導(dǎo)分化劑，第8天細(xì)胞用10%的甲醛固定1h后，用油紅O工作液（2mg/mL）染色2h，棄去油紅O，用雙蒸水充分洗干凈，培養(yǎng)板放入37℃溫箱使殘余水分蒸發(fā)掉，用異丙醇溶解細(xì)胞內(nèi)的油紅O，在510nm波長測吸光度。

1.3  統(tǒng)計學(xué)處理　

   
數(shù)據(jù)用±s表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，與對照組比較采用Dunnett t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2  結(jié)果

2.1  維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞增殖的影響

   
  1、10、100μmol/L維生素E組OD490與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表1。

表1  維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞增殖的影響（±s）

組別nOD490

對照組60.696±0.058

1μmol/L維生素E組60.668±0.067*
10μmol/L維生素E組60.689±0.031*
100μmol/L維生素E組60.630±0.095*

  注：與對照組相比，*P<0.05。

2.2  維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞分化的影響

   
1μmol/L維生素E對前脂肪細(xì)胞分化沒有影響，而在10～100μmol/L 時可抑制前脂肪細(xì)胞的分化（圖1、2，表2）。10μmol/L組、100μmol/L組細(xì)胞脂肪含量分別為對照組的57%、34%。

圖1  維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞分化的影響

    注：A為對照組維生素E前脂肪細(xì)胞油紅O染色；B為10 μmol/L組維生素E前脂肪細(xì)胞油紅O染色；C為100 μmol/L組維生素E前脂肪細(xì)胞油紅O染色

圖2  維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞分化的影響（×300）

表2  維生素E對3T3�睱1前脂肪細(xì)胞分化的影響（±s）

組別nOD510
對照組60.452±0.011

1μmol/L維生素E組60.413±0.010
10μmol/L維生素E組60.259±0.081*
100μmol/L維生素E組60.153±0.016*

    注：與對照組相比，*P<0.05。

3  討論

   
當(dāng)前，肥胖癥已經(jīng)成為嚴(yán)重的社會問題，但是肥胖癥的發(fā)病機(jī)制仍不明確。目前認(rèn)為，在細(xì)胞水平上，肥胖癥是由脂肪細(xì)胞增殖所引起的數(shù)目增多和/或分化所引起的體積增大所致。

   
3T3�睱1前脂肪細(xì)胞是從小鼠Swiss 3T3纖維母細(xì)胞克隆出來的，在誘導(dǎo)劑（包括insulin、IBMX和DEX）作用下，能分化為成熟的脂肪細(xì)胞［3］，是目前常用的研究脂肪細(xì)胞增殖和分化的細(xì)胞模型。